|
|
Poziční klonování genu Hst1 (Hybrid sterility 1) a molekulární analýza jeho kandidátních genů
Mihola, Ondřej ; Trachtulec, Zdeněk (vedoucí práce) ; Munclinger, Pavel (oponent) ; Pravenec, Michal (oponent)
Souhrnpub|ikací 1. PozičníklonovánígenuHsÍí(Hybridsterility1):jemné genetickémapovánía zhodnoceníkandidaturyvybraných kandidátníchgenů Gíle:Konstrukcefyziká|nímapyHsťíkandidátníob|astipomocíBAC k|onů. lso|ace nouýchgenetickýchmarkerů,pomocíkteých by by|o moŽnézúŽítHst1 kandidátníob|ast.Mým úkolemby|oověřeníkandidaturydvou vybranýchgenů z Hsťíob|asti'u kteýchby|azaznamenánazuýšenáexpreseve spermatogenezi. Metody: BAC (BacterialArtificialChromosome)klonypokýající HsÍíob|ast by|yisoloványz knihovnyBAC k|onůnatečkovanéna ny|ovovémembránypomocí hybridizaces radioaktivněznačenýmipróbami. Ke zmapováníiso|ovanýchBAC k|onůby|opouŽitoPCR amplifikujícícelkemosmznámých|okusůroz|oŽenýchpodé| ce|éHsťíob|asti.K|ony|emujícíHsťíob|astbylysubk|onoványa náhodněvybrané Úsekysekvenovány.Nově na|ezenémikrosatelitovémarkery,amp|ifikovanépomocí PCR a po|ymorfnímezi kmeny B10 a C3H' by|y pouŽityk mapováníHsfí na zvířatechze zpětnéhokříŽení.A||e|ickéC3H varianý genůlbp a Psmb1 by|y získány sekvenovánímPCR produktůamp|ifikovanýchz C3H cDNA knihovny. Kvantifikacetranskriptůobou genů byla provedena pomocí iso|ace RNA z patnáctidenníchferti|nícha steri|níchhybridů'jejím přepsánímdo cDNA a nás|ednýmPCR v reá|némčase. Výs|edky:V procesu pozičníhok|onovánígenu HsÍí by|a zkonstruována tyziká|nímapapomocíBAC k|onů'stabi|nějšícha...
|
|
|
Role histonových modifikací a genové exprese v myší spermatogenezi
Křivánková, Klára ; Mihola, Ondřej (vedoucí práce) ; Jansa, Petr (oponent)
Předpokladem sexuálního rozmnožování je u samců produkce haploidních spermií. Protein PRDM9 je histonová metyltransferáza lokalizující místa meiotické rekombinace řady savců. Myší samci kmene C57BL/6J (B6) deficientní pro Prdm9 (Prdm9-/- ) jsou sterilní, zatímco Prdm9-/- samci kmene PWD/Ph (PWD) mají snížený počet spermií. Porovnání rozmístění trimetylovaného lysinu 36 histonu 3 (H3K36me3) v genomu Prdm9- /- samců těchto dvou kmenů přispěje ke zjištění role této epigenetické modifikace v meiotické rekombinaci a v rozdílné plodnosti Prdm9-/- samců. Druhá část práce se zabývá transgenními samci. Samčí potomci první generace křížení samice B6 a samce PWD (B6PF1) mají snížené parametry plodnosti kvůli nekompatibilitě Prdm9 alel. U B6PF1 hybridů nesoucích transgen CHORI-34-289M8 či RP24-346I22 jsou parametry plodnosti ještě nižší. Ze stanovení relativní míry transkripce tří genů z transgenu a její korelace s počtem spermií byl za kandidátní gen, podílející se na snížení fertilních parametrů transgenních B6PF1 hybridů, určen gen kódující proteazomální podjednotku Psmb1. Důvodem snížené plodnosti by tak mohly být defekty v sestavování proteazomu. Studium fitness transgenních živočichů je důležité nejen pro základní výzkum, ale i z hlediska možností jejich uplatnění mimo výzkumná pracoviště.
|
|
|
Role metylace H3K36 při opravách DNA germinálních a somatických buněk
Křivánková, Klára ; Mihola, Ondřej (vedoucí práce) ; Schierová, Michaela (oponent)
Histonové modifikace ovlivňují celou řadu buněčných dějů, jedním z nich je i oprava poškození DNA. Tato práce se zaměřuje na metylaci lysinu 36 histonu 3 (H3K36). V první části práce je popsána role této modifikace v lokalizaci dvouvláknových zlomů DNA v germinálních buňkách. Dvouvláknové zlomy zde iniciují meiotickou rekombinaci, která je nezbytná pro správný průběh meiózy. V této práci jsou podrobněji popsány celkem tři metyltransferázy histonů. První z nich je PRDM9, enzym exprimovaný pouze v oocytech a spermatocytech během meiotické profáze a zodpovědný za rozmístění hotspotů rekombinace u většiny savců. Druhá část práce je zaměřena na roli metylace H3K36 na opravy poškození DNA v somatických buňkách pomocí homologní rekombinace (HR) a nehomologního spojení konců DNA (NHEJ). V druhé části práce jsou popsány metyltransferázy SETD2 a SETMAR. SETD2 trimetyluje H3K36 a H3K36me3 je rozeznávána proteinem LEDGF, díky kterému jsou k DNA naváděny další komponenty nutné pro HR. Protein SETMAR dimetyluje H3K36 a spolu s touto histonovou modifikaci podporuje opravu DNA zlomů pomocí NHEJ. Studium metylace H3K36 je důležité pro lepší pochopení jednotlivých způsobů oprav DNA. Správná oprava DNA zlomů je nutná pro udržení celistvosti genomu a potlačení vzniku rakoviny. Chybná regulace metylace H3K36 proto...
|
|
|
Poziční klonování genu Hst1 (Hybrid sterility 1) a molekulární analýza jeho kandidátních genů
Mihola, Ondřej ; Trachtulec, Zdeněk (vedoucí práce) ; Munclinger, Pavel (oponent) ; Pravenec, Michal (oponent)
Souhrnpub|ikací 1. PozičníklonovánígenuHsÍí(Hybridsterility1):jemné genetickémapovánía zhodnoceníkandidaturyvybraných kandidátníchgenů Gíle:Konstrukcefyziká|nímapyHsťíkandidátníob|astipomocíBAC k|onů. lso|ace nouýchgenetickýchmarkerů,pomocíkteých by by|o moŽnézúŽítHst1 kandidátníob|ast.Mým úkolemby|oověřeníkandidaturydvou vybranýchgenů z Hsťíob|asti'u kteýchby|azaznamenánazuýšenáexpreseve spermatogenezi. Metody: BAC (BacterialArtificialChromosome)klonypokýající HsÍíob|ast by|yisoloványz knihovnyBAC k|onůnatečkovanéna ny|ovovémembránypomocí hybridizaces radioaktivněznačenýmipróbami. Ke zmapováníiso|ovanýchBAC k|onůby|opouŽitoPCR amplifikujícícelkemosmznámých|okusůroz|oŽenýchpodé| ce|éHsťíob|asti.K|ony|emujícíHsťíob|astbylysubk|onoványa náhodněvybrané Úsekysekvenovány.Nově na|ezenémikrosatelitovémarkery,amp|ifikovanépomocí PCR a po|ymorfnímezi kmeny B10 a C3H' by|y pouŽityk mapováníHsfí na zvířatechze zpětnéhokříŽení.A||e|ickéC3H varianý genůlbp a Psmb1 by|y získány sekvenovánímPCR produktůamp|ifikovanýchz C3H cDNA knihovny. Kvantifikacetranskriptůobou genů byla provedena pomocí iso|ace RNA z patnáctidenníchferti|nícha steri|níchhybridů'jejím přepsánímdo cDNA a nás|ednýmPCR v reá|némčase. Výs|edky:V procesu pozičníhok|onovánígenu HsÍí by|a zkonstruována tyziká|nímapapomocíBAC k|onů'stabi|nějšícha...
|
host ::
RSS.