|
|
Vývoj hmotnostně-spektrometrických metod pro strukturní analýzu mastných kyselin a estolidů
Cudlman, Lukáš ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent) ; Lísa, Miroslav (oponent)
(CZ) Tato disertační práce shrnuje použití moderních hmotnostně-spektrometrických metod pro strukturní identifikaci mastných kyselin a estolidů triacylglycerolů (TG-EST) a jejich následnou charakterizaci v lipidomu novorozeneckého mázku, tj. biofilmu pokrývajícího pokožku lidského plodu během posledního trimestru těhotenství. Novorozenecký mázek je především známý svými antimikrobiálními vlastnostmi a schopností hojení ran a popálenin. První část disertační práce se zaměřuje na rozmanitost mastných kyselin v lipidomu novorozeneckého mázku. Tyto kyseliny tvoří strukturní podjednotky komplexních lipidů, např. hojně zastoupených triacylglycerolů a voskových esterů. Studiem mastných kyselin a jejich strukturních rysů bylo možné v této práci získat cenné poznatky o strukturní variabilitě celého lipidomu novorozeneckého mázku. Bez plného pochopení struktury těchto klíčových podjednotek by bylo v budoucnu nemožné dokončit analýzu tohoto lipidomu. Mastné kyseliny byly v této práci charakterizovány pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) a pokročilých metod hmotnostní spektrometrie, a to fotodisociace ultrafialovým zářením (UVPD) a disociace vyvolané ozonem (OzID). Spojení HPLC a hmotnostní spektrometrie (HPLC-MS) poskytlo jednoznačné informace o polohách a geometrii dvojných vazeb a...
|
|
|
Využití HPLC-HRMS pro studium látek ze skupiny takrinu potenciálně využitelných v terapii Alzheimerovy choroby.
Novák, Martin ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Hroch, Miloš (oponent) ; Lísa, Miroslav (oponent)
1 Abstrakt Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Farmaceutické Chemie a Farmaceutické Analýzy Kandidát: Mgr. Martin Novák Konzultant: doc. Mgr. et Mgr. Rafael Doležal, Ph.D. Školitel: doc. PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Název: Využití HPLC-HRMS pro studium látek ze skupiny takrinu potenciálně využitelných v terapii Alzheimerovy choroby. Vysokoúčinná kapalinová chromatografie ve spojení s vysokorozlišující hmotnostní spektrometrií (HPLC-HRMS) je analytickou technikou, která je velmi často využívaná při vývoji nových léčiv. Široké uplatnění tato technika nalézá od potvrzení navrhované struktury a identifikace přítomných nečistot, přes hodnocení absorpce, distribuce, metabolismu a exkrece až po monitorování otrav a intoxikací. Předkládaná disertační práce se v teoretické části zaměřuje na základní charakteristiku Alzheimerovy nemoci, její aktuálně dostupnou terapii a na nové strategie léčby. Dále je zde věnována pozornost i oblastem úzce spojeným s experimentální částí a to: studiu farmakokinetiky, analytickým nástrojům pro stanovení farmakokinetických parametrů, kapalinové chromatografii, hmotnostní spektrometrii a specifikům bioanalytických metod. Experimentální práce je komentářem ke čtyřem publikovaným pracím zabývajících se tematikou vývoje a preklinického hodnocení látek ze...
|
|
|
Využití HPLC-HRMS pro studium látek ze skupiny takrinu potenciálně využitelných v terapii Alzheimerovy choroby.
Novák, Martin ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Hroch, Miloš (oponent) ; Lísa, Miroslav (oponent)
1 Abstrakt Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Farmaceutické Chemie a Farmaceutické Analýzy Kandidát: Mgr. Martin Novák Konzultant: doc. Mgr. et Mgr. Rafael Doležal, Ph.D. Školitel: doc. PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Název: Využití HPLC-HRMS pro studium látek ze skupiny takrinu potenciálně využitelných v terapii Alzheimerovy choroby. Vysokoúčinná kapalinová chromatografie ve spojení s vysokorozlišující hmotnostní spektrometrií (HPLC-HRMS) je analytickou technikou, která je velmi často využívaná při vývoji nových léčiv. Široké uplatnění tato technika nalézá od potvrzení navrhované struktury a identifikace přítomných nečistot, přes hodnocení absorpce, distribuce, metabolismu a exkrece až po monitorování otrav a intoxikací. Předkládaná disertační práce se v teoretické části zaměřuje na základní charakteristiku Alzheimerovy nemoci, její aktuálně dostupnou terapii a na nové strategie léčby. Dále je zde věnována pozornost i oblastem úzce spojeným s experimentální částí a to: studiu farmakokinetiky, analytickým nástrojům pro stanovení farmakokinetických parametrů, kapalinové chromatografii, hmotnostní spektrometrii a specifikům bioanalytických metod. Experimentální práce je komentářem ke čtyřem publikovaným pracím zabývajících se tematikou vývoje a preklinického hodnocení látek ze...
|
|
|
Lipidomic analysis of vernix caseosa
Harazim, Eva ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Lísa, Miroslav (oponent) ; Kuda, Ondřej (oponent)
Metody analytické chemie jsou v lipidomice široce používané, a to zejména chromatografie ve spojení s hmotnostní spektrometrií či nukleární magnetická rezonance. Díky těmto technikám je možné identifikovat i lipidy vyskytující se v matrici ve velice malém množství. Tato práce shrnuje využití moderních analytických metod a instrumentace při zjišťování identity a charakterizace lipidů obsažených v novorozeneckém mázku. Ukazuje také, jakým dílem jsem v průběhu studia přispěla k rozpoznání struktury a charakterizaci neznámých lipidových tříd a k detailnějšímu popisu již těch identifikovaných v novorozeneckém mázku. Nedílnou součástí mé práce byla aplikace metody umožňující lokalizaci dvojných vazeb vyvinutou naší laboratoří u triacylglycerolů a 1,2-diesterů diolů novorozeneckého mázku. Tato analytická metoda je založena na tvorbě acetonitrilového aduktu v iontovém zdroji hmotnostního spektrometru s chemickou ionizací za atmosférického tlaku. Složitost třídy triacylglycerolů neumožnila kompletní charakterizaci dvojných vazeb. Fragmentace však ukázala přítomnost dvojných vazeb až do polohy n-12, ale byly rovněž identifikovány malé píky naznačující dvojné vazby ve vzdálených pozicích od koncových řetězců. Spolupracovala jsem také na charakterizaci větvení řetězců a polohy dvojných vazeb mastných kyselin...
|
|
|
Určování poloh dvojných vazeb u triacylglycerolů pomoci HPLC/APCI-MS2
Háková, Eva ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Lísa, Miroslav (oponent)
Triacylglyceroly se řadí k jedné z nejhojněji zastoupené lipidové třídě. Jejich chemické, fyzikální i biologické vlastnosti se liší v závislosti na stupni nenasycenosti a polohách dvojných vazeb v acylech. Tato diplomová práce byla zaměřena na lokalizaci dvojných vazeb s využitím tandemové hmotnostní spektrometrie s chemickou ionizací za atmosférického tlaku. Bylo studováno 14 standardů a 44 směsí standardů triacylglycerolů s lišícím se počtem dvojných vazeb i délkou uhlovodíkového řetězce v acylech. Standardy byly získány z komerčních zdrojů a připraveny randomizačními reakcemi v mikroměřítku. Umístění dvojných vazeb se podařilo určit fragmentací molekulárního aduktu s C3H5N+· ([M+55]+·) vznikajícího za přítomnosti acetonitrilu v mobilní fázi. Tato metoda byla posléze aplikována při HPLC/MS analýzách přírodních směsí. Klíčová slova: triacylglyceroly, randomizace, určení polohy dvojné vazby, chemická ionizace za atmosférického tlaku, hmotnostní spektrometrie, vysokoúčinná kapalinová chromatografie s hmotnostní detekcí
|
|
|
Využití LC/MS pro studium biotransformace xenobiotik u helmintů
Vokřál, Ivan ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Lísa, Miroslav (oponent) ; Horák, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát Mgr. Ivan Vokřál Školitel Doc. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Název disertační práce Využití LC/MS pro studium biotransformace xenobiotik u helmintů Parazité každoročně způsobují mnoho ztrát na lidských životech, ale i na hospodářských zvířatech. Jednou z efektivních zbraní, které proti nim můžeme využít, jsou anthelmintika. V řadě případů však anthelmintika přestávají působit a dochází k rozvoji rezistence. Jednou z možných příčin vzniku rezistence je inaktivace léčiva na neaktivní nebo málo aktivní produkty pomocí biotransformace enzymatickým systémem parazita. Cílem této práce bylo přinést nové poznatky o biotransformaci léčiv u helmintů. Důraz byl kladen na vztah biotransformace k rezistenci. Jednou z možných technik, jak tohoto cíle dosáhnout, je studovat přímo produkty biotransformace, tedy metabolity. V dnešní době se tato problematika nejčastěji řeší za pomoci kapalinové chromatografie a hmotnostní spektrometrie a proto i pro splnění našich cílů byla tato technika využita. Byly studovány biotransformace u zástupců tasemnic, motolic a hlístic. Tam, kde to bylo možné, byli studováni zástupci hospodářsky významní jako vlasovka slézová (Haemonchus contortus) nebo motolice kopinatá (Dicrocoelium...
|
|
|
Chromatographic and mass-spectrometric analysis of lipids of vernix caseosa
Vavrušová, Aneta ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Kuda, Ondřej (oponent) ; Lísa, Miroslav (oponent)
Lipidomika je rychle se rozšiřující vědní obor, který zaznamenal v posledních letech vzrůstající pozornost a to zejména díky zvyšujícímu se vědomí o stěžejních rolích lipidů v biologických systémech. Hlavním cílem lipidomiky je systematické studium všech lipidů, zahrnuje popis jejich struktury, biologických funkcí v buňce a rovněž popis interakcí lipidů s dalšími molekulami. Spojení pokročilých analytických metod, jako je extrakce, chromatografie a hmotnostní spektrometrie, umožňuje efektivním způsobem studovat všechny aspekty lipidomiky. Předkládaná dizertační práce je komentovaným souborem ke dvěma publikovaným pracím a zabývá se využitím separačních technik a hmotnostní spektrometrie pro detekci a strukturní charakterizaci nových lipidových tříd v novorozeneckém mázku. V prvním případě bude popsáno použití techniky bezvodé kapalinové chromatografie na reverzní fázi ve spojení s tandemovou hmotnostní spektrometrií s chemickou ionizací za atmosférického tlaku (LC-APCI-MS2 ) pro strukturní charakterizaci cholesterol esterů ω-(O-acyl)-hydroxy mastných kyselin (Chl-ωOAHFAs) v novorozeneckém mázku. Pro účel izolace neutrálních Chl-ωOAHFAs byla vyvinuta metoda adsorpční tenkovrstvé chromatografie. Obecná struktura Chl-ωOAHFAs byla odvozena na základě analýzy jejich produktů transesterifikace a...
|
|
|
Lipidomic analysis of vernix caseosa
Harazim, Eva ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Lísa, Miroslav (oponent) ; Kuda, Ondřej (oponent)
Metody analytické chemie jsou v lipidomice široce používané, a to zejména chromatografie ve spojení s hmotnostní spektrometrií či nukleární magnetická rezonance. Díky těmto technikám je možné identifikovat i lipidy vyskytující se v matrici ve velice malém množství. Tato práce shrnuje využití moderních analytických metod a instrumentace při zjišťování identity a charakterizace lipidů obsažených v novorozeneckém mázku. Ukazuje také, jakým dílem jsem v průběhu studia přispěla k rozpoznání struktury a charakterizaci neznámých lipidových tříd a k detailnějšímu popisu již těch identifikovaných v novorozeneckém mázku. Nedílnou součástí mé práce byla aplikace metody umožňující lokalizaci dvojných vazeb vyvinutou naší laboratoří u triacylglycerolů a 1,2-diesterů diolů novorozeneckého mázku. Tato analytická metoda je založena na tvorbě acetonitrilového aduktu v iontovém zdroji hmotnostního spektrometru s chemickou ionizací za atmosférického tlaku. Složitost třídy triacylglycerolů neumožnila kompletní charakterizaci dvojných vazeb. Fragmentace však ukázala přítomnost dvojných vazeb až do polohy n-12, ale byly rovněž identifikovány malé píky naznačující dvojné vazby ve vzdálených pozicích od koncových řetězců. Spolupracovala jsem také na charakterizaci větvení řetězců a polohy dvojných vazeb mastných kyselin...
|
|
|
Určování poloh dvojných vazeb u triacylglycerolů pomoci HPLC/APCI-MS2
Háková, Eva ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Lísa, Miroslav (oponent)
Triacylglyceroly se řadí k jedné z nejhojněji zastoupené lipidové třídě. Jejich chemické, fyzikální i biologické vlastnosti se liší v závislosti na stupni nenasycenosti a polohách dvojných vazeb v acylech. Tato diplomová práce byla zaměřena na lokalizaci dvojných vazeb s využitím tandemové hmotnostní spektrometrie s chemickou ionizací za atmosférického tlaku. Bylo studováno 14 standardů a 44 směsí standardů triacylglycerolů s lišícím se počtem dvojných vazeb i délkou uhlovodíkového řetězce v acylech. Standardy byly získány z komerčních zdrojů a připraveny randomizačními reakcemi v mikroměřítku. Umístění dvojných vazeb se podařilo určit fragmentací molekulárního aduktu s C3H5N+· ([M+55]+·) vznikajícího za přítomnosti acetonitrilu v mobilní fázi. Tato metoda byla posléze aplikována při HPLC/MS analýzách přírodních směsí. Klíčová slova: triacylglyceroly, randomizace, určení polohy dvojné vazby, chemická ionizace za atmosférického tlaku, hmotnostní spektrometrie, vysokoúčinná kapalinová chromatografie s hmotnostní detekcí
|
|
|
Využití LC/MS pro studium biotransformace xenobiotik u helmintů
Vokřál, Ivan ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Lísa, Miroslav (oponent) ; Horák, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát Mgr. Ivan Vokřál Školitel Doc. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Název disertační práce Využití LC/MS pro studium biotransformace xenobiotik u helmintů Parazité každoročně způsobují mnoho ztrát na lidských životech, ale i na hospodářských zvířatech. Jednou z efektivních zbraní, které proti nim můžeme využít, jsou anthelmintika. V řadě případů však anthelmintika přestávají působit a dochází k rozvoji rezistence. Jednou z možných příčin vzniku rezistence je inaktivace léčiva na neaktivní nebo málo aktivní produkty pomocí biotransformace enzymatickým systémem parazita. Cílem této práce bylo přinést nové poznatky o biotransformaci léčiv u helmintů. Důraz byl kladen na vztah biotransformace k rezistenci. Jednou z možných technik, jak tohoto cíle dosáhnout, je studovat přímo produkty biotransformace, tedy metabolity. V dnešní době se tato problematika nejčastěji řeší za pomoci kapalinové chromatografie a hmotnostní spektrometrie a proto i pro splnění našich cílů byla tato technika využita. Byly studovány biotransformace u zástupců tasemnic, motolic a hlístic. Tam, kde to bylo možné, byli studováni zástupci hospodářsky významní jako vlasovka slézová (Haemonchus contortus) nebo motolice kopinatá (Dicrocoelium...
|
host ::
RSS.