|
|
Detekce poškození DNA a sledování jeho opravy
Kohoutová, Dagmar ; Kovařík, Miroslav (vedoucí práce) ; Fikrová, Petra (oponent)
Detekce poškození DNA a sledování jeho opravy Dagmar Kohoutová ABSTRAKT V této diplomové práci jsem se zabývala sledováním indukce a reparace křížových vazeb způsobených cis-platinou, k jejichž detekci byl použit modifikovaný kometo- vý test. Experimenty byly prováděny na liniích A-549, HeLa, HELF, XPA, XPC, CHO AA8 a CHO UV-20 (linie XPA, XPC a CHO UV-20 jsou deficitní v genech potřeb- ných pro korektní opravu poškozené DNA). Poškození bylo indukováno jednu hodinu 20, 40, 80 a 160 µM cis-Pt, reparace probí- hala po dobu 3 a 23 hodin. K detekci křížových vazeb byly buňky inkubovány v pří- tomnosti 800 µM styrenoxidu (SO), poté byla provedena alkalická verze kometového testu a analýza vzorků pomocí softwaru LUCIA® Comet Assay. Nejnižší indukce křížových vazeb po jedné hodině byla zaznamenána u buněčné li- nie A-549 a XPC (87 a 86 % DNA v ohonu), nejvyšší u CHO UV-20 (70 % DNA v oho- nu). Po čtyřech hodinách inkubace byl u všech buněčných linií pozorován nárůst poškození DNA křížovými vazbami (největší u linií HELF a XPA, % DNA v ohonu se snížilo o 49 a 48 %). Oprava poškozené DNA po 24 hodinách byla pozorována u buněč- ných linií A-549 (reparace 44, 68 % poškození) a CHO AA8 (odstraněno 33,12 % poško- zení). U ostatních linií byl pozorován další nárůst množství křížových vazeb. Na závěr byl proveden MTT test...
|
host ::
RSS.