|
|
LC-MS monitorování vybraných antimikrobních látek ve vodách
Krupka, Dominik ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Kastner, Petr (oponent)
4 Abstrakt Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Dominik Krupka Vedoucí diplomové práce: doc. PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Konzultant diplomové práce: Ing. Martin Ferenčík Název diplomové práce: LC-MS monitorování vybraných antimikrobních látek ve vodách Sledování reziduí humánních a veterinárních antibiotik v povrchových vodách získává, vzhledem ke vzrůstající rezistenci bakterií, stále na větší důležitosti. Tato práce se zabývá adaptováním HPLC-MS/MS metody pro získání pilotních dat o výskytu antibiotik v povrchových vodách. Metoda je zaměřena na analýzu 30 antibiotik ze skupin β-laktamů, makrolidů, linkosamidů, amfenikolů, fluorochinolonů, tetracyklinů a sulfonamidů. Analýza byla vykonána na přístroji UHPLC Agilent 1200 Infinity series s MS Agilent model 6495 triple Quad. Separace antibiotik byla provedena na reverzní fázi s využitím gradientové eluce a pro jejich detekci byla využita tandemová hmotnostní spektrometrie. Pro ionizaci analytů byl použit elektrosprej v kladné i záporné polaritě. Metoda byla použita pro pilotní analýzu vzorků povrchových vod České republiky. Byly analyzovány vzorky z 15 toků. Nejčastěji nalézanými antibiotiky byly sulfomethoxazol a klarithromycin. Klíčová slova: HPLC, MS, Antibiotika,...
|
|
|
Retention Behaviour of Catecholamines and Their Precursors under HILIC Conditions
Tibenský, Andrej ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Štěrbová, Petra (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Andrej Tibenský Vedúci diplomovej práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Názov diplomovej práce: Retenčné správanie katecholamínov a ich prekurzorov v HILIC podmienkach Témou diplomovej práce bolo skúmanie retenčného správania katecholamínov a ich prekurzorov v HILIC podmienkach za použitia spektrofotometrickej a fluorimetrickej detekcie. Skúmaných bolo 5 analytov - adrenalín, noradrenalín, dopamín, L-DOPA a tyrozín. Najskôr bolo retenčné správanie skúmané za použitia LUNA 3 µm (PFP)2 kolóny vykazujúcej RP-LC aj HILIC charakteristiky s 2 rôznymi mobilnými fázami. Prvá bola v zložení 25 mM octovej kyseliny v zmesi acetonitrilu a vody a druhá mobilná fáza pozostávala z 25 mM acetátového pufra (pH 4,50) v zmesi acetonitrilu a vody. Následne bol skúmaný efekt stacionárnej fázy na neutrálnej kolóne XBridge BEH Amide a kolónach Avantor ACE HILIC-A a Sequant ZIC-HILIC s iónovými interakciami. Mobilné fázy obsahovali vysoký podiel acetonitrilu (70-90 %) a ich zloženie bolo nasledovné - 25 mM octovej kyseliny v zmesi acetonitrilu a vody. Ďalej sa skúmal efekt zmeny koncentrácie aditíva mobilnej fázy (octová kyselina) na retenčné správanie analytov, a to na kolónach XBridge BEH Amide a...
|
|
|
Use of liquid chromatography in pharmaceutical analysis II.
Sovič, Samuel ; Pilařová, Pavla (vedoucí práce) ; Kastner, Petr (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Samuel Sovič Školiteľ: PharmDr. Pavla Pilařová, Ph.D. Názov diplomovej práce: Využitie kvapalinovej chromatografie vo farmaceutickej analýze II Diplomová práca sa zaoberá analýzou retenčného chovania vybraných antiepileptík: Gabapentin, Levetiracetam, Primidon a Lamotrigin. Boli testované tri rôzne C18 stacionárne fázy Phenyl ; PFP; Kinetex, rôzne zloženie mobilnej fázy, teplota na kolóne a vhodné vlnové dĺžky v rozmedzí 210-220 nm pre všetky analyty. Optimálne podmienky analýzy boli na kolóne Agilent Eclipse XDB-Phenyl 5 μm (4,6mm x 150mm), pri teplote 40 řC a prietoku MF 0,8 ml/min, pri vlnovej dĺžke 220 nm. Vytvorením gradientu bola analýza skrátená z 15 minút pri izokratickej elúcii na 9 minút. Metóda bola čiastočne validovaná z hľadiska linearity, presnosti, precíznosti, selektivity a robustnosti. Ďalej bola metóda aplikovaná na reálne vzorky pacientov z FN HK.
|
|
|
Stanovení metabolitů tyrosinu III
Licková, Gabriela ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Váňová, Nela (oponent)
UNIVERZITA KARLOVA FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ KATEDRA FARMACEUTICKÉ CHEMIE A FARMACEUTICKÉ ANALÝZY Kandidát: Gabriela Licková Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Konzultant: Ing. Daniel Heblík Název diplomové práce: Stanovení metabolitů tyrosinu Tématem diplomové práce bylo stanovení metabolitů tyrosinu (adrenalin, noradrenalin, dopamin, L-DOPA) s využitím derivatizační reakce a následnou analýzou za použití vysokoúčinné kapalinové chromatografie s fluorescenčním detektorem. Stěžejním krokem celé práce byla optimalizace podmínek derivatizační reakce. Jako derivatizační činidlo byl použit FMOC-Cl (fluorenylmethyloxykarbonyl chlorid), který reagoval s katecholaminy v přítomnosti borátového pufru. Nejprve byla stanovena vhodná koncentrace činidla (2,7 mM), čas (15 min) a teplota (40 řC) reakce. Dále byla optimalizována koncentrace (100 mM) a pH (8,0) borátového pufru. Pro účinnou separaci bylo nutné nastavit vhodné podmínky. Kolona byla použita silikagelová Kinetex EVO C18 s částicemi s pevným jádrem. Složení mobilní fáze bylo nutné optimalizovat a výsledná mobilní fáze se skládala z kyseliny mravenčí (20 mM) a acetonitrilu v poměru 32:68. Výsledná použitá průtoková rychlost činila 0,6 ml/min. Kolona byla temperována na 40 řC. Nástřikový objem byl 5 μl a doba celé analýzy...
|
|
|
Retention Behaviour of Catecholamines and Their Precursors under HILIC Conditions
Tibenský, Andrej ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Štěrbová, Petra (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Andrej Tibenský Vedúci diplomovej práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Názov diplomovej práce: Retenčné správanie katecholamínov a ich prekurzorov v HILIC podmienkach Témou diplomovej práce bolo skúmanie retenčného správania katecholamínov a ich prekurzorov v HILIC podmienkach za použitia spektrofotometrickej a fluorimetrickej detekcie. Skúmaných bolo 5 analytov - adrenalín, noradrenalín, dopamín, L-DOPA a tyrozín. Najskôr bolo retenčné správanie skúmané za použitia LUNA 3 µm (PFP)2 kolóny vykazujúcej RP-LC aj HILIC charakteristiky s 2 rôznymi mobilnými fázami. Prvá bola v zložení 25 mM octovej kyseliny v zmesi acetonitrilu a vody a druhá mobilná fáza pozostávala z 25 mM acetátového pufra (pH 4,50) v zmesi acetonitrilu a vody. Následne bol skúmaný efekt stacionárnej fázy na neutrálnej kolóne XBridge BEH Amide a kolónach Avantor ACE HILIC-A a Sequant ZIC-HILIC s iónovými interakciami. Mobilné fázy obsahovali vysoký podiel acetonitrilu (70-90 %) a ich zloženie bolo nasledovné - 25 mM octovej kyseliny v zmesi acetonitrilu a vody. Ďalej sa skúmal efekt zmeny koncentrácie aditíva mobilnej fázy (octová kyselina) na retenčné správanie analytov, a to na kolónach XBridge BEH Amide a...
|
|
|
LC-MS monitorování vybraných antimikrobních látek ve vodách
Krupka, Dominik ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Kastner, Petr (oponent)
4 Abstrakt Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Dominik Krupka Vedoucí diplomové práce: doc. PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Konzultant diplomové práce: Ing. Martin Ferenčík Název diplomové práce: LC-MS monitorování vybraných antimikrobních látek ve vodách Sledování reziduí humánních a veterinárních antibiotik v povrchových vodách získává, vzhledem ke vzrůstající rezistenci bakterií, stále na větší důležitosti. Tato práce se zabývá adaptováním HPLC-MS/MS metody pro získání pilotních dat o výskytu antibiotik v povrchových vodách. Metoda je zaměřena na analýzu 30 antibiotik ze skupin β-laktamů, makrolidů, linkosamidů, amfenikolů, fluorochinolonů, tetracyklinů a sulfonamidů. Analýza byla vykonána na přístroji UHPLC Agilent 1200 Infinity series s MS Agilent model 6495 triple Quad. Separace antibiotik byla provedena na reverzní fázi s využitím gradientové eluce a pro jejich detekci byla využita tandemová hmotnostní spektrometrie. Pro ionizaci analytů byl použit elektrosprej v kladné i záporné polaritě. Metoda byla použita pro pilotní analýzu vzorků povrchových vod České republiky. Byly analyzovány vzorky z 15 toků. Nejčastěji nalézanými antibiotiky byly sulfomethoxazol a klarithromycin. Klíčová slova: HPLC, MS, Antibiotika,...
|
|
|
HPLC stanovení vybraných antibiotik v plazmě
Sedláčková, Andrea ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Pilařová, Pavla (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Andrea Sedláčková Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Petr Kastner, PhD. Název diplomové práce: HPLC stanovení vybraných antibiotik v plazmě Cílem této diplomové práce bylo vyvinout a optimalizovat podmínky pro stanovení vybraných antibiotik (meropenem, imipenem, ceftazidim, piperacilin a linezolid) v plazmě za použití vysokoúčinné kapalinové chromatografie, přičemž meropenem měl být hlavní stanovovanou látkou. Separace byla provedena na silikagelové koloně Ascentis® C18 (100Å, 150 × 4,6 mm; 5 µm) s využitím spektrofotometrické detekce. Vybraná antibiotika byla detekována při různých vlnových délkách (298 nm pro meropenem a imipenem, 254 nm pro ceftazidim a linezolid, 210 nm pro piperacilin) na základě maximální absorbance daných antibiotik. Byly zkoušeny různé mobilní fáze stejně jako různá pH pufru, který byl pro mobilní fázi použit. Výsledná mobilní fáze se skládala ze dvou složek: mobilní fáze A: fosfátový pufr 50 mM; pH 2,5 mobilní fáze B: acetonitril Separace bylo dosaženo gradientovou elucí. Průtoková rychlost byla nastavena na 1 ml/min a objem nástřiku byl 10 µl. Kolonový prostor byl temperován na 25řC. Celková doba analýzy byla 15 min. Validace vyvinuté metody nebyla...
|
|
|
Studie retenčních vlastností vybraných metabolitů tyrosinu v podmínkách HPLC
Gieslerová, Michaela ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Pilařová, Pavla (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Michaela Gieslerová Vedoucí diplomová práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Název diplomové práce: Studie retenčních vlastností vybraných metabolitů tyrosinu v podmínkách HPLC Tématem diplomová práce bylo studium retenčních vlastností vybraných metabolitů tyrosinu v podmínkách vysokoúčinné kapalinové chromatografie s použitím spektrofotometrické (285 nm) a fluorimetrické detekce (emisní 279, excitační 320). Celkem bylo zkoumáno 8 analytů - tyrosin, L-DOPA, dopamin, adrenalin, noradrenalin, kyselina homovanilová a vanilmandlová. Nejprve byl zkoumán vliv složení mobilní fáze, koncentrace pufru a pH na separaci daných analytů. Analýza proběhla na referenční koloně KINETEX 5 μm EVO C18 (150 mm x 3 mm, 5 μm; PHENOMENEX). Jako nejlépe hodnocená mobilní fáze byla methanol:100 mM kyselina octové (pH bylo upraveno hydroxidem sodným na 4,5); 5:95. Poté byl studován vliv složení stacionární fáze na separaci s použitím mobilní fáze, která je popsaná dříve. Celkem bylo studováno 7 různých kolon, a to SF s modifikovaným silikagel C18 skupinou, PFP skupinou, dále kombinované SF (C18 skupina s aromatickým jádrem, kombinace C18 skupina s PFP) a na závěr dvě kolony se skupinou C18 a dále...
|
|
|
Vývoj a validace HPLC metody pro stanovení 3-hydroxykynureninu v biologickém materiálu
Knoblochová, Dominika ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Váňová, Nela (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Dominika Knoblochová Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj a validace HPLC metody pro stanovení 3-hydroxykynureninu v biologickém materiálu 3-hydroxykynurenin je jedním z metabolitů tryptofanu a je studován zvláště pro svoji oxidačně modulační aktivitu, díky které má schopnost chránit buňky před oxidačním stresem. Je tvořen z kynureninu katalýzou enzymu kynurenin 3-monooxygenasa, jehož aktivita je sledována na Katedře farmakologie a toxikologie. Pro její studování je třeba kvantitativně stanovit 3-hydroxykynurenin v biologické matrici. Cílem této diplomové práce bylo vyvinout HPLC metodu pro stanovení 3-hydroxykynureninu v biologickém materiálu s použitím vysokoúčinné kapalinové chromatografie a následně metodu validovat. Během vývoje bylo testováno několik mobilních fází s různými hodnotami pH. Výsledná mobilní fáze byla tvořena 100mM kyselinou mravenčí (pH = 2,25) a methanolem (95:5). Byly také zkoušeny různé typy stacionárních fází, z nichž byla nakonec zvolena kolona YMC TRIART PFP s rozměry 15 × 3 mm a rozměrem částic 5 µm. K detekci 3-hydroxykynureninu byl zvolen UV-VIS detektor, na němž byla nastavena vlnová délka 370 nm. Byla...
|
|
|
HPLC analýza podofylotoxinu
Nováková, Markéta ; Pilařová, Pavla (vedoucí práce) ; Kastner, Petr (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Markéta Nováková Školitel: PharmDr. Pavla Pilařová, Ph.D. Název diplomové práce: HPLC analýza podofylotoxinu Diplomová práce se zabývá optimalizací podmínek HPLC metody pro analýzu podofylotoxinu. Metoda byla vyvíjena pro analýzu extraktu z drogy z jalovce virginského (Juniperus virginiana L., var. Blue Arrow). Byly testovány různé stacionární fáze, mobilní fáze, teplota, doba extrakce pomocí ultrazvuku. Jako optimální byly vybrány tyto podmínky: doba extrakce drogy na ultrazvuku 30 minut, kolona LiChrospher 100 RP-18 250-4, mobilní fáze 0,1% CH3COOH:ACN v poměru 45:55, teplota 40 řC, průtok 0,8 ml/min, nástřik 3 μl, fluorimetrická detekce λex 240 nm, λem 320 nm, doba analýzy 9 minut. Metoda byla poté vyvíjena i pro extrakt z explantátové kultury jalovce virginského, pro který byla zvolena gradientová eluce. Tato metoda měla následující podmínky: kolona LiChrospher 100 RP-18 250-4, mobilní fáze 0,1% CH3COOH:ACN, změna poměru vodné složky: 0-8 min 70-10 %, 8-9 min 10 %, 9-10 min 10-70 %, 10-12 min 70 %, teplota 40 řC, průtok 0,8 ml/min, nástřik 3 μl, fluorimetrická detekce λex 240 nm, λem 320 nm, doba analýzy 12 minut. Obě metody byly následně validovány. Hodnocenými...
|
host ::
RSS.