|
|
Detailní charakterizace chirálních stacionárních fází na bázi makrocyklických glykopeptidů v SFC
Folprechtová, Denisa ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent) ; Kohout, Michal (oponent)
Mezi klíčové faktory úspěšné enantioseparace v chromatografických metodách patří především volba vhodné chirální stacionární fáze. Makrocyklické glykopeptidy jsou chirální selektory, které vzhledem ke své unikátní struktuře umožňují interagovat s analytem různými typy interakcí současně, což přispívá k jejich komplexnímu retenčnímu a enantiodiskriminačnímu mechanismu. Makrocyklické glykopeptidy jsou hojně využívanými chirálními stacionárními fázemi v kapalinové chromatografii, ale dosud nebyly podrobně testovány v systémech sub/superkritické fluidní chromatografie, která v současnosti patří k významným separačním technikám z hlediska chirálních analýz. Proto je cílem této disertační práce podrobná charakterizace enantiodiskriminačních a retenčních mechanismů chirálních stacionárních fází na bázi makrocyklických glykopeptidů vázaných na "core-shell" částicích, tj. TeicoShell, VancoShell a NicoShell kolon v systémech sub/superkritické fluidní chromatografie. Nejprve byl podrobně studován vliv složení mobilní fáze, především typ a množství organických modifikátorů a aditiv, na jednotlivé chromatografické parametry, tj. retence, rozlišení enantiomerů a tvary píků prostřednictvím vybrané sady strukturně odlišných biologicky významných chirálních sloučenin a materiálů. Na základě získaných výsledků byl...
|
|
|
Studium retence a separace peptidů v HPLC
Boudová, Hana ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Kubíčková, Anna (oponent)
Tato diplomová práce se zabývá studiem retence a separace strukturně odlišných peptidů a štěpných produktů cytochromu c pomocí kapalinové chromatografie v reverzním a smíšeném (mix) módu. Mezi modelové peptidy bylo vybráno pět nemodifikovaných dipeptidů, devět dipeptidů obsahující chránicí benzoylovou skupinu na N-koncové aminokyselině a osm terapeutických peptidů (penta- až dekapeptidy). Chromatografické chování modelových peptidů bylo testováno na třech různých kolonách: XBridge C18, XSelect CSH C18 a Atlantis Premier BEH C18 AX za různých podmínek. Byl testován vliv pH vodné složky mobilní fáze, tj. 2,1; 3,0; 4,7 a 6,8, a množství acetonitrilu v mobilní fázi na retenci a separaci vybraných peptidů. Dále byl sledován vliv koncentrace octanu amonného o pH = 6,8 v mobilní fázi na retenci a symetrii píků peptidů v koncentračním rozmezí 10-50 mmol l-1 . Byly optimalizovány chromatografické podmínky pro separaci 20 modelových peptidů na základní linii na koloně XSelect CSH C18 v mobilní fázi acetonitril/10mM octan amonný, pH = 6,8, (v/v) za použití gradientové eluce. V rámci této práce byly také optimalizovány chromatografické podmínky pro analýzu a identifikaci fragmentů trypticky naštěpeného cytochromu c. Mix mód kolona Atlantis Premier BEH C18 AX vykazovala nejvyšší selektivitu pro sledované...
|
|
|
Stanovení L-tryptofanu v potravinových doplňcích metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie
Pešková, Pavlína ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Kubíčková, Anna (oponent)
Tato bakalářská práce se zabývá nalezením optimálních podmínek pro stanovení tryptofanu pomocí metody HPLC s UV detekcí. Množství tryptofanu bylo stanovováno ve dvou potravinových doplňcích. Pro nalezení vhodných podmínek pro stanovení tryptofanu byl sledován vliv složení mobilní fáze na retenci analytu a symetrii píku, a to ve dvou různých módech vysokoúčinné kapalinové chromatografie - reverzním módu za použití kolony Atlantis dC18 a mix-módu za použití kolony Atlantis PREMIER BEH C18 AX. Konkrétně byl testován vliv typu a množství organického modifikátoru (acetonitril/methanol), vliv pH pufru octanu amonného (4,7; 5,9; 7,0) a jeho koncentrace (5mM/10mM) v mobilní fázi. Na základě získaných dat byly vybrány nejvhodnější podmínky (z hlediska doby analýzy a symetrie píku), ve kterých byly určeny vybrané validační parametry jako opakovatelnost, reprodukovatelnost, limit detekce a limit kvantifikace. Vybrané chromatografické podmínky byly následující: mix-mód kolona Atlantis PREMIER BEH C18 AX, mobilní fáze acetonitril/5mM octan amonný, pH 7,0 10/90 (v/v), separační teplota 25 řC, průtok mobilní fáze 1 ml/min a detekce při vlnové délce 254 nm. V těchto podmínkách bylo provedeno stanovení obsahu tryptofanu v potravinových doplňcích metodou kalibrační křivky a metodou přídavku standardu. Uvedený obsah...
|
|
|
Studium retence a separace pesticidů v různých módech kapalinové chromatografie
Dérerová, Tímea ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Riesová, Martina (oponent)
3 Abstrakt Předkládaná bakalářská práce byla zaměřena na separaci směsi šesti pesticidů v reverzním a "mixed módu" vysokoúčinné kapalinové chromatografie na kolonách Atlantis dC18, XSelect CSH C18, XSelect CSH Fluoro-Phenyl a Atlantis Premier BEH C18 AX. Stejné výrobní parametry - rozměry kolony a částic nosiče, umožnily vzájemné porovnávání stacionárních fází z hlediska "retentivity" a selektivity. Hodnocené byly na základě Waltersova testu, kategorizujícího stacionární fáze podle jejich hydrofobicity, silanolové aktivity a účinnosti. Separovanými analyty byly pesticidy s různým mechanismem účinku v životním prostředí. Dva pesticidy obsahovaly disociovatelnou kyselou funkční skupinu, což způsobilo, že při složení mobilní fáze voda/acetonitril eluovaly s mrtvým časem kolony. K potlačení disociace byly místo vody použity pufry, konkrétně 10mM octan amonný, pH 4,7 a 10mM mravenčan amonný, pH 3,0. Použití těchto pufrů v mobilní fázi vedlo ke zvýšení retence těchto pesticidů na všech testovaných kolonách. Kolony vykazovaly různou retenci a selektivitu pro pesticidy a k optimalizaci separačních podmínek se postupovalo experimentální metodou, zásahem do chromatografických parametrů, a to změnou složení mobilní fáze, pH a teploty. Bylo prokázáno, že jak retenční čas, tak rozlišení a tvar chromatografického píku...
|
|
|
Optimalizace separace a kvantifikace předpokládaných produktů velkého třesku
Smitka, Jaroslav ; Tesařová, Eva (vedoucí práce) ; Kalíková, Květa (oponent)
Bakalářská práce je příspěvkem k výzkumu zaměřenému na modelování podmínek velkého třesku a sledování případných reakčních produktů. Jako výchozí sloučeniny byly vybrány 2-amino-1-butanol, 3-methoxy-1-propanol, 2-methyl-1-butanol a formamid, z nichž některé byly následně ostřelovány PALSem na Fyzikálním ústavu Jaroslava Heyrovského AV ČR. Pro analýzu byly testovány metody plynové chromatografie s hmotnostní detekcí a kapalinová chromatografie s UV detekcí. V systému GC-MS byly proměřeny kalibrační závislosti 3-methoxy-1-propanolu a 2-methyl-1-butanolu a vypočteny hodnoty LOD resp. LOQ. Srovnání analýzy neostřelovaného a ostřelovaného 3-methoxy-1-propanolu neukázalo vznik nových reakčních produktů, neboť výchozí 3-methoxy-1-propanol byl v přílišném nadbytku. Zjištěné sloučeniny lze spíše identifikovat jako nečistoty přítomné v rozpouštědle či ve vlastním standardu. V optimalizovaném systému HPLC se podařilo vzájemně rozdělit tři standardy. Formamid, který je nevhodný k analýze plynovou chromatografií, vzhledem k jeho vysoké polaritě, však eluoval ve všech testovaných separačních systémech HPLC v oblasti systémových píků (s mrtvým časem). Přesto byl pro srovnání analyzován vzorek ostřelovaný PALSem i původní standard. Srovnání však neukázalo žádné produkty reakce v ostřelovaném vzorku. Klíčová slova:...
|
|
|
Separace a stanovení možných produktů enzymového štěpení 4-nitrofenyl-N,N'-diacetyl-β-D-chitobiosidu pomocí kapilární elektroforézy
Velvarská, Romana ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Kalíková, Květa (oponent)
Tato práce se zabývá vývojem a optimalizací podmínek metody, kterou lze využít k porovnání aktivity enzymu β-N-acetylhexosaminidasy při hydrolýze jejího přirozeného substrátu a tvz. chromogenního substrátu, který se často využívá při studiu enzymové kinetiky. Jako substrát pro štěpení byl zvolen 4-nitrofenyl-N,N'-diacetyl-β- D-chitobiosid. Tento oligosacharid obsahuje vazbu, kterou enzym štěpí v přirozeném substrátu, a zároveň také vazbu, která se vyskytuje v substrátu chromogenním. Pro stanovení produktů, jež vznikají při enzymatické hydrolýze 4-nitrofenyl-N,N'-diacetyl- β-D-chitobiosidu byla využita kapilární zónová elektroforéza. Nejprve bylo nutno najít optimální složení základního elektrolytu, tedy jeho hodnotu pH a koncentraci. Optimálním základním elektrolytem byl roztok tetraboritanu sodného o koncentraci 25 mmol/l a hodnotě pH 10,25. Následně byla zjištěna opakovatelnost měření, kalibrační závislosti a linearita, limit detekce a limit kvantifikace. Opakovatelnost migračních časů se pohybovala do 0,6%, opakovatelnost plochy píků pak v rozmezí 2,5 až 6,3%. Limity detekce metody byly v rozmezí 0,005-0,120 mmol/l. Nakonec byla optimalizovaná metoda úspěšně použita ke sledování průběhu skutečného enzymového štěpení.
|
|
|
Charakterizace a porovnání nových kolon v reverzním módu HPLC
Putzová, Klára ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Předkládaná bakalářská práce je zaměřena na zjištění a porovnání interakčních a separačních vlastností tří kolon, XBridge C18, XSelect CSH C18 a XSelect HSS C18 určených pro reverzní mód vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Všechny kolony obsahují oktadecylový ligand, ale liší se v typu nosiče, na který je ligand vázaný. Kolony byly porovnány z hlediska jejich silanolové aktivity, indexu hydrofobicity, tvarové selektivity a účinnosti za použití jednoduchých testů podle autorů Walterse, Engelhardta a Galushky. Dále byly optimalizovány podmínky pro separace vybraných pesticidů acetochloru, fomesafenu, isoproturonu, metazachloru a triflumuronu v mobilních fázích obsahujících acetonitril nebo methanol jako organický modifikátor a vodu. Testované kolony vykazovaly nízkou silanolovou aktivitu a střední až vysoký index hydrofobicity. Nízká silanolová aktivita všech tří kolon koreluje s tzv. endkapingem všech tří testovaných fází. Analyty byly více zadržovány v methanolové mobilní fázi, což souvisí s nižší eluční silou methanolu v porovnání s acetonitrilem v reverzním módu vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Doba analýzy vybraných pesticidů se lišila pro jednotlivé kolony při použití stejných chromatografických podmínek. Nejkratší doba analýzy byla získána na koloně XBridge C18, která také vykazovala...
|
|
|
Optimalizace separace derivátů penicilinu metodou HPLC
Šímová, Veronika ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Tesařová, Eva (oponent)
Peniciliny patří mezi β-laktamová antibiotika, která jsou velice rozšířená v humánním i veterinárním lékařství. Cílem této bakalářské práce bylo vyvinout a optimalizovat HPLC metodu pro separaci čtyř derivátů penicilinu - amoxicilinu, 4-hydroxyfenoxymethylpenicilinu, benzylpenicilinu a fenoxymethylpenicilinu. Byl vybrán reverzní mod HPLC s oktadecylovou stacionární fází. Za podmínek izokratické eluce se nepodařilo rozseparovat všechny analyty až na základní linii. Z tohoto důvodu byla použita gradientová eluce, při které se podařilo rozseparovat všechny analyty na základní linii do 22 minut. Během experimentu byla také studována stabilita methanolických roztoků penicilinů v průběhu několika dní pomocí HPLC. Klíčová slova: HPLC, antibiotika, deriváty penicilinu, reverzní mod, stabilita
|
|
| |
|
|
Chirální separace nově syntetizovaných aminokyselin metodou HPLC
Kučerová, Gabriela ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Riesová, Martina (oponent)
Tato diplomová práce je zaměřena na nalezení optimálních podmínek pro chirální separace nově syntetizovaných aminokyselin pomocí metody vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Soubor studovaných látek obsahuje čtyři N-blokované deriváty D,L- Fenylalaninu, tři N-neblokované deriváty D,L-Fenylalaninu, D,L-Fenylalanin, jeden methylovaný derivát D,L-Tyrosinu a D,L-Tyrosin. Pro analýzu byly použity dva separační módy - reverzní mód a polárně-organický mód na dvou chromatografických kolonách - Chirobiotic® T a Chirobiotic® T2, jejichž stacionární fáze jsou tvořeny makrocyklickým antibiotikem teikoplaninem vázaným na silikagelový nosič. V reverzním módu na koloně Chirobiotic® T byla použita mobilní fáze složená z methanolu a octanového pufru. Jako nejvhodnější koncentrace a pH octanového pufru se ukázala koncentrace 20 mM a pH 4,00. Ze souboru deseti studovaných enantiomerů se při výše uvedených podmínkách podařilo nalézt optimální podmínky pro osm z nich. Polárně- organický mód na koloně Chirobiotic® T byl vhodný pouze pro tři N-blokované deriváty D,L-Fenylalaninu při použití mobilní fáze složené z methanolu s malými přídavky triethylaminu a kyseliny octové. Kolona Chirobiotic® T2 při použití reverzního módu nebyla příliš vhodná pro separaci daného souboru látek. Došlo zde pouze k částečné separaci...
|
host ::
RSS.