|
|
New inhibitors of topoisomerase II - study of antiproliferative effects and influence on antitumor activity of anthracyclines
Vrobelová, Adriana ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Jirkovská, Anna (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Adriana Vrobelová Školiteľ: prof. PharmDr. Tomáš Šimůnek, PhD. Názov diplomovej práce: Nové inhibítory topoizomerázy II - štúdia antiproliferačných účinkov a vplyvu na protinádorovú aktivitu antracyklínov Napriek svojej dávkovo obmedzujúcej kardiotoxicite patria antracyklíny (ANT) medzi najpoužívanejšie a najefektívnejšie protinádorové liečivá. Jediným registrovaným liečivom k prevencii vzniku ANT kardiotoxicity je dexrazoxán, ktorého kardioprotektívne účinky sa aktuálne pripisujú interakcii s topoizomerázou 2 (TOP2) beta. Táto relatívne nová hypotéza poskytuje priestor pre objav a štúdium nových inhibítorov TOP2, ktoré by mohli byť použité ako výhodnejšie kardioprotektívne liečivá. Zásadnou podmienkou pre použitie potenciálneho kardioprotektíva je však absencia negatívneho ovplyvnenia protinádorovej účinnosti ANT. V tejto práci sme študovali antipoliferačnú aktivitu nových látok odvodených od parentnej molekuly BNS-22, ktorá je katalytickým inhibítorom TOP2 a prejavila kardioprotekčnú aktivitu. Okrem toho sme študovali aj ich vplyv na antiproliferačný účinok daunorubicínu (DAU) pre objasnenie kompatibility v prípade kombinovaného použitia s ANT. Dané experimenty boli uskutočnené na leukocytárnej bunkovej...
|
|
|
Vliv resveratrolu a kyseliny gambogové na poškození DNA neonatálních potkaních kardiomyocytů vyvolané daunorubicinem.
Mašín, Martin ; Jirkovská, Anna (vedoucí práce) ; Pávek, Petr (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Martin Mašín Školitel: PharmDr. Anna Jirkovská, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv resveratrolu a kyseliny gambogové na poškození DNA neonatálních potkaních kardiomyocytů vyvolané daunorubicinem. DNA topoizomerasy jsou skupinou enzymů, které jsou schopny měnit topologii DNA pomocí přechodných jednořetězcových nebo dvouřetězcových zlomů (DSB) během fundamentálních procesů jako je replikace a transkripce. Inhibice topoizomerasy II (TOP II) je hlavním mechanismem účinku některých protinádorových léčiv, včetně antracyklinových antibiotik (ANT; např. daunorubicin). Jejich působením dochází k tvorbě DSB a později k apoptóze. Některé další inhibitory TOP II, které působí jiným mechanismem, mohou ovlivňovat vznik DSB nebo jiného poškození DNA, a tak modulovat také účinek ANT. V této diplomové práci jsme studovali poškození DNA v neonatálních potkaních kardiomyocytech vyvolané daunorubicinem (DAU) a jeho hlavním metabolitem daunorubicinolem (DAUnol) a vliv dvou přírodních látek a inhibitorů TOP II, resveratrolu (RES) a kyseliny gambogové (GA), na poškození DNA vyvolané DAU dvěma odlišnými metodami. Stanovovali jsme míru fosforylace histonu H2AX (γ-H2AX) pomocí imunoblotu a porovnali s výsledky získanými pomocí...
|
|
|
New inhibitors of topoisomerase II - study of antiproliferative effects and influence on antitumor activity of anthracyclines
Vrobelová, Adriana ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Jirkovská, Anna (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Adriana Vrobelová Školiteľ: prof. PharmDr. Tomáš Šimůnek, PhD. Názov diplomovej práce: Nové inhibítory topoizomerázy II - štúdia antiproliferačných účinkov a vplyvu na protinádorovú aktivitu antracyklínov Napriek svojej dávkovo obmedzujúcej kardiotoxicite patria antracyklíny (ANT) medzi najpoužívanejšie a najefektívnejšie protinádorové liečivá. Jediným registrovaným liečivom k prevencii vzniku ANT kardiotoxicity je dexrazoxán, ktorého kardioprotektívne účinky sa aktuálne pripisujú interakcii s topoizomerázou 2 (TOP2) beta. Táto relatívne nová hypotéza poskytuje priestor pre objav a štúdium nových inhibítorov TOP2, ktoré by mohli byť použité ako výhodnejšie kardioprotektívne liečivá. Zásadnou podmienkou pre použitie potenciálneho kardioprotektíva je však absencia negatívneho ovplyvnenia protinádorovej účinnosti ANT. V tejto práci sme študovali antipoliferačnú aktivitu nových látok odvodených od parentnej molekuly BNS-22, ktorá je katalytickým inhibítorom TOP2 a prejavila kardioprotekčnú aktivitu. Okrem toho sme študovali aj ich vplyv na antiproliferačný účinok daunorubicínu (DAU) pre objasnenie kompatibility v prípade kombinovaného použitia s ANT. Dané experimenty boli uskutočnené na leukocytárnej bunkovej...
|
|
|
Indukce oxidačního stresu u buněk kožních keratinocytů
Martínková, Nikola ; Jirkovská, Anna (vedoucí práce) ; Hradiská Breiterová, Kateřina (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Studentka: Nikola Martínková Vedoucí práce: PharmDr. Anna Jirkovská, Ph.D. Konzultant: Mgr. Petr Jošt, Ph.D. Název diplomové práce: Indukce oxidačního stresu u buněk kožních keratinocytů Keratinocyty jsou součástí epidermis a představují majoritní část buněk svrchní vrstvy lidské kůže. Při poškození těchto buněk mutagenními látkami mohou nastat změny ve složení genetického materiálu, popřípadě může dojít i k zániku buňky. Mezi látky, které navozují změny v DNA a mají mutagenní potenciál lze zařadit i zpuchýřující bojovou chemickou látku sirný yperit. Cílem této práce bylo porovnat buněčnou linii keratinocytů HaCaT s experimentálně odvozenou buněčnou linií 3HSM4 v odpovědi na oxidační stres indukovaný peroxidem vodíku. Buňky 3HSM4 byly připraveny selekcí rezistentních klonů buněk HaCaT, které byly opakovaně vystaveny cytotoxickým účinkům sirného yperitu. Výsledky porovnání ukazují, že buňky 3HSM4 jsou rezistentnější vůči peroxidu vodíku. Pokud byla u obou typů buněk blokována syntéza glutathionu (GSH), byl cytotoxický účinek peroxidu vodíku stejný. Přesto, že se buňky 3HSM4 ukázaly jako odolnější z pohledu cytotoxicity, byla u nich zjištěna mnohem vyšší hladina volných radikálů než u buněk HaCaT. Při analýze...
|
|
|
Vliv resveratrolu a kyseliny gambogové na poškození DNA neonatálních potkaních kardiomyocytů vyvolané daunorubicinem.
Mašín, Martin ; Jirkovská, Anna (vedoucí práce) ; Pávek, Petr (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Martin Mašín Školitel: PharmDr. Anna Jirkovská, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv resveratrolu a kyseliny gambogové na poškození DNA neonatálních potkaních kardiomyocytů vyvolané daunorubicinem. DNA topoizomerasy jsou skupinou enzymů, které jsou schopny měnit topologii DNA pomocí přechodných jednořetězcových nebo dvouřetězcových zlomů (DSB) během fundamentálních procesů jako je replikace a transkripce. Inhibice topoizomerasy II (TOP II) je hlavním mechanismem účinku některých protinádorových léčiv, včetně antracyklinových antibiotik (ANT; např. daunorubicin). Jejich působením dochází k tvorbě DSB a později k apoptóze. Některé další inhibitory TOP II, které působí jiným mechanismem, mohou ovlivňovat vznik DSB nebo jiného poškození DNA, a tak modulovat také účinek ANT. V této diplomové práci jsme studovali poškození DNA v neonatálních potkaních kardiomyocytech vyvolané daunorubicinem (DAU) a jeho hlavním metabolitem daunorubicinolem (DAUnol) a vliv dvou přírodních látek a inhibitorů TOP II, resveratrolu (RES) a kyseliny gambogové (GA), na poškození DNA vyvolané DAU dvěma odlišnými metodami. Stanovovali jsme míru fosforylace histonu H2AX (γ-H2AX) pomocí imunoblotu a porovnali s výsledky získanými pomocí...
|
|
|
Vliv topoisomerasy II beta na citlivost nádorových buněk k protinádorové terapii
Jaščevská, Nikola ; Jirkovská, Anna (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Nikola Jaščevská Školitel: PharmDr. Anna Jirkovská, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv topoisomerasy II beta na citlivost nádorových buněk k protinádorové terapii Topoisomerasa II (TOP II) je buněčný enzym zodpovědný za řešení topologických problémů dvouřetězcové DNA. Izoformy TOP II alfa a beta jsou produkty různých genů s téměř stejnou katalytickou funkcí. Exprese TOP IIα je vázána na G2/M fázi buněčného cyklu, zatímco TOP II je exprimována kontinuálně. Je proto na rozdíl od TOP IIα přítomna i v neproliferujících diferencovaných buňkách. Antracyklinová antibiotika jsou starou skupinou protinádorových léčiv, která patří mezi TOP II jedy. Ačkoli je jejich klinické použití časté, incidence vedlejších účinků (zejména myelotoxicity a kardiotoxicity) jejich použití omezuje. Stále častěji je diskutována role inhibice TOP II, která je taktéž přítomna v kardiomyocytech. Dexrazoxan, jediné klinicky používané kardioprotektivum, způsobuje depleci TOP II v kardiomyocytech, což by mohlo vysvětlovat jeho účinnost. Ačkoli se již dříve ukázalo, že TOP II je pro buněčnou proliferaci postradatelná, není dosud znám efekt deplece TOP II na citlivost nádorových buněk k protinádorovým léčivům ze skupiny inhibitorů TOP II....
|
|
|
Effect of selected antineoplastic drugs on the gene expression of DNA repair proteins
Klčová, Silvia ; Jirkovská, Anna (vedoucí práce) ; Suchá, Simona (oponent)
Univerzita Karlova v Prahe, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických vied Kandidát: Bc. Silvia Klčová Školiteľ: PharmDr. Anna Jirkovská, Ph.D. Názov práce: Vplyv vybraných protinádorových liečiv na génovú expresiu proteínov účastniacich sa bunkovej odpovede na poškodenie DNA Každá jedna bunka ľudského organizmu je nepretržite vystavovaná širokému spektru stresových faktorov, konzekvenciou ktorých vznikajú poškodenia v molekule DNA. Vzniknuté zmeny predstavujú škálu alterácií - od jednoduchých alkylačných modifikácií báz až po najnepriaznivejšie dvojvláknové zlomy. Vplyv bunkového stresu a následné genotoxické poškodenie DNA je však dvojsečná zbraň. Na jednej strane môžu byť typické alterácie v genóme vyvolané vplyvom mutagénnych agens (ako napríklad zložky tabakového dymu či ionizujúce žiarenie), pričom akumuláciou dôsledkov ich pôsobenia nastane strata kontroly nad jednotlivými krokmi bunkového cyklu, čo vyústi v nádorovú transformáciu bunky. Avšak na strane druhej, navodenie detrimentálneho účinku zasahujúceho do genómu nádorových buniek je jedným zo základných prístupov cytostatickej liečby malignít. V našej práci sme sa preto zamerali na štúdium niekoľkých antineoplastických liečiv široko využívaných v klinickej praxi (etopozid, daunorubicín), či podstupujúcich klinické...
|
|
|
The effect of in vitro and ex vivo placental cells stimulation on expression of selected ABC and OATP transporters
Dudičová, Simona ; Čečková, Martina (vedoucí práce) ; Jirkovská, Anna (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakológie a toxikológie Študentka: Simona Dudičová Školiteľ: doc. PharmDr. Martina Čečková, Ph.D. Názov diplomovej práce: Vplyv stimulácie placentárnych buniek in vitro a ex vivo na expresiu vybraných ABC a OATP transportérov Placenta je orgánom, ktorý hrá kľúčovú úlohu v priebehu celého tehotenstva pre správny vývin plodu. Jednou z dôležitých funkcií, ktoré placenta poskytuje, je transport látok medzi matkou a plodom. Tento prestup látok umožňujú prevažne membránové transportéry, ktoré sa nachádzajú na apikálnej a bazálnej membráne syncytiotrofoblastu. Počas rôznych fyziologických alebo patologických zmien v ľudskom tele sa ich expresia a množstvo môže meniť. S týmito zmenami súvisia aj zápalové reakcie, ktoré sa môžu v tehotenstve vyskytnúť, a preto sme sa touto problematikou zaoberali a domnievali, že tento stav môže zmeniť expresiu placentárnych transportérov. Cieľom tejto práce bolo skúmať expresiu zmeny membránových prenášačov pomocou placentárnych buniek na BeWo bunkovej línií a placentárnych vilóznych explantoch, ktoré boli stimulované prozápalovými mediátormi. Skúmala sa zmena expresie jednotlivých vybraných placentárnych transportérov zo skupiny ATP- dependentných proteínov, konkrétne ABCB1 a ABCG2, aj z rodiny tzv. SLC...
|
|
|
Studium poškození DNA pomocí PCR
Jansová, Adéla ; Jirkovská, Anna (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Abstakt Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Biochemických věd Kandidátka: Bc. Adéla Jansová Školitel: PharmDr. Anna Jirkovská, Ph.D. Název diplomové práce: Studium poškození DNA pomocí PCR Klíčová slova: funkce DNA, DNA poškození, PCR, SINE elementy Předávání genetické informace budoucím generacím je možné díky replikaci DNA za pomoci enzymů, hlavně DNA polymerasy. Nejdůležitější funkcí DNA je biosyntéza proteinů, které vykonávají specifické funkce v celé buňce. Kódující DNA sekvence jsou zdrojem pro syntézu proteinů. Ty vznikají transkripcí dané sekvence za pomoci RNA polymerasy a následně jsou translací přeloženy na aminokyseliny. Nekódující sekvence mají hlavně regulační funkce, jsou to funkční molekuly DNA (rRNA, tRNA, snRNA) a regulační oblasti (promotory, zesilovače a tlumiče), dále také transpozony (SINE, LINE) a pseudogeny. Poškození DNA způsobuje UV záření, ionizační záření, chemické látky (léky na bázi cisplatiny, alkylační látky, apod.), reaktivní formy kyslíku a také dochází k poškození DNA deaminací bází. Při poškození se aktivují opravné procesy, které odstraňují chybné párování, addukty a zlomy. Pokud se nepodaří poškození odstranit opravnými procesy, dochází k tvorbě mutací, senescenci nebo buněčné smrti. Stanovit poškození DNA je možné několika metodami podle...
|
|
|
Detekce kovalentních komplexů proteinů s DNA s použitím fluorescenční mikroskopie
Melicharová, Růžena ; Jirkovská, Anna (vedoucí práce) ; Novotná, Eva (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Biochemických věd Kandidát: Růžena Melicharová Školitel: PharmDr. Anna Jirkovská, Ph.D. Název diplomové práce: Detekce kovalentních komplexů proteinů s DNA s použitím fluorescenční mikroskopie Antracyklinová antibiotika patří mezi nejúčinnější protinádorová léčiva. Jejich mechanismus účinku je komplexní. Působí jako interkalační činidla, způsobují vznik DNA aduktů a působí na topoisomerasu (TopII) jako jedy. Katalytický cyklus TopII je přerušen ve chvíli, kdy antracykliny stabilizují kovalentní komplex DNA a TopII, a tím způsobují buněčné poškození. Použití antracyklinů je však limitováno několika závažnými nežádoucími účinky, jako je myelotoxicita či kardiotoxicita. Mechanismus kardiotoxicity stále není jasný, ale mohl by být spojený s působením na TopIIβ isoformu. TopIIβ je na rozdíl od TopIIα přítomna v buňkách diferencovaných, jako jsou kardiomyocyty. Navíc jediný klinicky používaný kardioprotektant dexrazoxan patří mezi TopII katalytické inhibitory. Nicméně detaily protektivního působení zajištěného dexrazoxanem jsou nejasné. Cílém této práce bylo optimalizovat metodu TARDIS (trapped in agarose DNA immunostaining) k detekci a kvantifikaci kovalentních komplexů, porovnat různé způsoby analýzy počtu komplexů a vybrat vhodnou...
|
host ::
RSS.