|
|
Automatické monitorování uvolnění Metridia luciferázy z geneticky modifikované buněčné linie
Jozičová, Natali ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Horstkotte, Burkhard (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Analytické chemie Kandidát: Natali Jozičová Školitel: doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Konzultant: prof. Manuel Miró Název diplomové práce: Automatické monitorování uvolnění Metridia luciferázy z geneticky modifikované buněčné linie. Diplomová práce se zabývá automatickým monitorováním uvolněné Metridia luciferázy z geneticky modifikovaných buněk v reálném čase. Během práce byla použita již dříve optimalizovaná metoda pro monitorování přirozeného přebytku luciferázy z buněk. Zároveň byl testován toxický účinek žlučových kyselin (chenodeoxycholové a deoxycholové) na změny permeability buněčné membrány. Během experimentu byly použity jaterní epiteliální buňky, které byly modifikovány Metridia luciferázovým plazmidem. Po této genetické modifikaci byly buňky schopny syntetizovat aktivní enzym Metridia luciferázu. Tento enzym vykazuje po reakci se substrátem koelenterazinem luminiscenci. Emitované záření bylo následně detekováno v průtokové cele spektrofluorimetru při vlnové délce 485 nm. Měření bylo provedeno za pomocí sekvenční injekční analýzy, která byla propojena přes průtokový systém s 3D tištěnou celou, jenž obsahovala insert s testovanou monovrstvou buněk. Toto propojení umožnilo automatické monitorování uvolňování luciferázy...
|
|
|
Study of BTEX determination by microextraction in the Lab-in-syringe system coupled with gas chromatography
Kohániová, Andrea ; Horstkotte, Burkhard (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Andrea Kohániová Školiteľ: M.Sc. Burkhard Horstkotte, Ph.D. Konzultant: PharmDr. Ivana Horstkotte Šrámková, Ph.D. Názov: Štúdium stanovenia BTEX mikroextrakciou v systéme Lab-in-syringe v spojení s plynovou chromatografiou Benzén, toluén, etylbenzén a izoméry xylénov sú jednými z hlavných kontaminantov detekovaných vo vzorkách vody zo životného prostredia. Svetová zdravotnícka organizácia považuje tieto látky za toxické pre ľudí, a preto ich monitorovanie je mimoriadne dôležité. Možnosť stanovenia BTEX mikroextrakciou do jednej kvapky rozpúšťadla bola skúmaná v systéme Lab-in-syringe v spojení s plynovou chromatografiou a plameňovo ionizačným detektorom. Boli hodnotené parametre ako objem kvapky, čas extrakcie, typ a použitie soľného roztoku a parametre separácie chromatografickej metódy. Záujmom tejto práce bolo automatizovanie celého procesu, a to prostredníctvom prvkov tlačených na 3D tlačiarni.
|
|
|
Automatické monitorování uvolnění Metridia luciferázy z geneticky modifikované buněčné linie
Jozičová, Natali ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Horstkotte, Burkhard (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Analytické chemie Kandidát: Natali Jozičová Školitel: doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Konzultant: prof. Manuel Miró Název diplomové práce: Automatické monitorování uvolnění Metridia luciferázy z geneticky modifikované buněčné linie. Diplomová práce se zabývá automatickým monitorováním uvolněné Metridia luciferázy z geneticky modifikovaných buněk v reálném čase. Během práce byla použita již dříve optimalizovaná metoda pro monitorování přirozeného přebytku luciferázy z buněk. Zároveň byl testován toxický účinek žlučových kyselin (chenodeoxycholové a deoxycholové) na změny permeability buněčné membrány. Během experimentu byly použity jaterní epiteliální buňky, které byly modifikovány Metridia luciferázovým plazmidem. Po této genetické modifikaci byly buňky schopny syntetizovat aktivní enzym Metridia luciferázu. Tento enzym vykazuje po reakci se substrátem koelenterazinem luminiscenci. Emitované záření bylo následně detekováno v průtokové cele spektrofluorimetru při vlnové délce 485 nm. Měření bylo provedeno za pomocí sekvenční injekční analýzy, která byla propojena přes průtokový systém s 3D tištěnou celou, jenž obsahovala insert s testovanou monovrstvou buněk. Toto propojení umožnilo automatické monitorování uvolňování luciferázy...
|
|
|
Automatizace metody extrakce pevnou fází pro stanovení flavonoidů s využitím průtokového systému
Krovová, Tereza ; Horstkotte, Burkhard (vedoucí práce) ; Sklenářová, Hana (oponent)
Katedra: Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Tereza Krovová Školitel: M.Sc. Burkhard Horstkotte, Ph.D. Konzultant: PharmDr. Ivana Horstkotte Šrámková, Ph.D. Název diplomové práce: Automatizace metody extrakce pevnou fází pro stanovení flavonoidů s využitím průtokového systému Tato diplomová práce se zabývala vývojem a optimalizací metody pro automatizovanou extrakci tuhou fází v průtokovém systému s využitím platformy Lab- On-Valve pro stanovení flavonoidů. Extrakce tuhou fází provedená technikou bead injection byla následována spektrofotometrickou detekcí v UV oblasti. Metoda byla optimalizována pro stanovení kvercetinu a jeho pěti metabolitů: rutinu, kyseliny 3,4-dihydroxyfenyloctové, kyseliny homovanilové, kyseliny 3-(3- hydroxyfenyl)propionové a 4-methylkatecholu. Mezi optimalizované parametry patřil výběr vhodného sorbentu pro extrakci, množství tohoto sorbentu pro tvorbu kolonky, pH dávkovacího pufru, složení elučního činidla a promývacího roztoku, průtokové rychlosti pro dávkování a vymývání vzorků, objem vzorku, poměr vzorku a pufru a vliv okyselení vzorku. Optimalizace metody na stanovení flavonoidů byla provedena na standardních roztocích a nyní je připravena pro aplikaci na biologických vzorcích.
|
|
|
Comparison of manual and dynamic extractions of selected transition metals from solid samples
Kucharčíková, Vendula ; Horstkotte, Burkhard (vedoucí práce) ; Horstkotte Šrámková, Ivana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Analytické chemie Kandidát: Vendula Kucharčíková Školitel: Burkhard Horstkotte Konzultant: Doc. PharmDr. Hana Sklenářová Ph.D. Název diplomové práce: Porovnání manuální a dynamické extrakce vybraných přechodných kovů z pevných vzorků Analýza stopových kovů v půdě je předmětem studií mnoha laboratoří. Díky rozsáhlým průmyslovým zónám může být půda vysoce kontaminována. Tato práce se soustředila na dvě jednoduché metody - manuální extrakci a průtokovou extrakci se stejným extraktantem - kyselinou octovou. Dvě metody, dvě koncentrace a dva vzorky byly použity k vyhodnocení nejvýhodnějších podmínek. Jako detekční zařízení byla vybrána optická emisní spektrometrie s indukčně vázanou plazmou a dvě vlnové délky k zabránění interferencí. Manuální extrakce byla více časově náročná a hůře opakovatelná než ta dynamická. Vyšší koncentrace kyseliny octové (0,43 M) extrahovala vyšší množství kovů a extrakce vykazovala vyšší opakovatelnost výsledků. U obou půd kontaminace mědí přesáhla maximální povolené množství tohoto kovu (podle požadavků vlády Baleárských ostrovů) a jsou potenciálně kontaminované.
|
|
|
Spectrophotometric determination of chlorhexidine in mouthwash employing Lab-In-Syringe automated ion-pair extraction and back-extraction
Řeháková, Pavla ; Horstkotte, Burkhard (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Pavla Řeháková Školitel: Dr. Burkhard Horstkotte, Ph.D., M.Sc. Konzultant: doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Název diplomové práce: Spektrofotometrické stanovení chlorhexidinu v ústní vodě s využitím extrakce iontového asociátu a zpětné extrakce automatizované v systému Lab-In-Syringe Práce popisuje disperzní kapalinovou mikroextrakci pomocí magnetického míchadla (MSA-DLLME), která je automatizována technikou Lab-In-Syringe. MSA-DLLME je založena na míchání vzorku s nemísitelným rozpouštědlem pomocí magnetického míchadla za účelem rozptýlení rozpouštědla na jemné kapky, což vede k podpoře extrakčního procesu. Magnetické míchadlo je umístěno uvnitř rezervoáru pístového čerpadla, který je použit jako extrakční komora. Pro umožnění použití extrakčního rozpouštědla, které je lehčí než voda, bylo v této práci pístové čerpadlo otočeno ústím dolů. Tato metoda byla navržena a optimalizována pro stanovení chlorhexidinu v komerčních vzorcích ústní vody. Aby byla extrakce umožněna, bylo potřeba vytvořit iontový pár chlorhexidinu s činidlem methyloranž. Po extrakci iontového páru do organického rozpouštědla byla k roztoku přidána kyselina chlorovodíková, do které byl analyt zpětně extrahován za účelem dosažení...
|
|
|
Monitorování toxikologických testů
Rosecká, Michaela ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Horstkotte, Burkhard (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Michaela Rosecká Školitel: Doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Název diplomové práce: Monitorování toxikologických testů Cílem této práce bylo monitorování kinetických profilů permeace fluorescenčního markeru přes monovrstvu buněk (MDCKII-MDR) pomocí sekvenční injekční analýzy. K tomuto účelu byl využit nový typ cely, který umožňuje měření ze 2 kompartmentů - donorového a akceptorového. Cela byla během experimentu termostatována na 37řC a obsah akceptorového kompartmentu byl nepřetržitě míchán. Experiment byl vždy několikrát opakován, aby byla zajištěna opakovatelnost interakce látky s membránovým transportérem. Inserty s monovrstvou buněk MDCKII-MDR byly po každém experimentu vyměněny. Buňky použité v tomto experimentu měly geneticky modifikovaný P-glykoprotein. K on-line monitorování extracelulárního transportu byl využit Rhodamin 123 jakožto fluorescenční marker. Kinetika průchodu tohoto markeru byla sledována pomocí plně automatizovaného systému sekvenční injekční analýzy, a to v pětiminutových intervalech vždy po dobu 120 minut. Vzorek byl vždy v jednom cyklu odebírán z donorového kompartmentu, v následujícím cyklu pak z kompartmentu akceptorového. Dále byl zkoumán vliv inhibitoru...
|
|
|
Study of deproteinization of milk samples via salting-out induced phase separation and automation by Lab-In-Syringe
Machián, Daniel ; Horstkotte, Burkhard (vedoucí práce) ; Sklenářová, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Daniel Machián Školitel: M.Sc. Burkhard Horstkotte, Ph.D. Konzultant: PharmDr. Kateřina Fikarová, Ph.D. Název diplomové práce: Studie deproteinizace vzorků mléka pomocí fázové separace indukované vysolováním a automatizace v Lab-In-Syringe V této práci byl zkoumán nový přístup k deproteinizaci vzorku založený na homogenní kapalinové extrakci s vysolováním indukovanou fázovou separací. Byl vyvinut, experimentálně otestován a optimalizován postup, který umožňuje automatizovanou deproteinizaci vzorků mléka pomocí techniky Lab-In-Syringe, bez potřeby centrifugace. Stejně jako v jiných metodách přípravy vzorků bylo cílem eliminovat matrici vzorku a získat organickou fázi, která by mohla být podrobena analýze. Práce zahrnuje řadu předběžných experimentů prováděných offline, tj. bez zamýšleného instrumentace, jakož i optimalizační experimenty prováděné online pomocí systému Lab-In-Syringe. Byly testovány vysolovací činidla a tři rozpouštědla, stejně jako fázové poměry a provozní parametry systému Lab-In-Syringe, včetně jeho konfigurace. V metodě optimalizované postupy popsanými v této práci, bylo dosaženo účinné denaturace a vysrážení mléčných proteinů vodou mísitelným rozpouštědlem, acetonitrilem, který...
|
|
|
Separace vybraných anorganických iontů pomocí sekvenční injekční chromatografie
Jarošová, Patrícia ; Horstkotte, Burkhard (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Patrícia Jarošová Školitelia: Dr. Burkhard Horstkotte, Ph.D., M.Sc. Doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Názov diplomovej práce: Separace vybraných anorganických iontů pomocí sekvenční injekční chromatografie Bola skúmaná schopnosť predkolóny Dionex Ionpac® CG5A (2 x 50 mm, P/N 046104) separovať niektoré katióny prechodných kovov vo vzorke vody, za použitia systému sekvenčnej injekčnej chromatografie (SIC). Použitá separácia bola iónovo výmenná, kolónu tvorili častice pokryté dvojvrstvou funkčného latexu schopného vymieňať katióny aj anióny. Ako chelatačné činidlo v mobilnej fáze bola použitá pyridín-2,6-dikarboxylová kyselina (PDCA) a reakčné činidlo obsahovalo 4-(2-pyridylazo) resorcinol (PAR). Detekcia prebiehala spektrofotometricky. Pri optimalizácií boli použité dve metódy: simplex a univariantná metóda. Boli nájdené ideálne podmienky pre separáciu. Mobilná fáza pozostávala z PDCA v koncentrácií 4 mmol/l, kyseliny mravčej v koncentrácií 40 mmol/l, síranu sodného v koncentrácií 4 mmol/l a hydroxidu sodného v koncentrácií 2 mmol/l. Reakčné činidlo bolo zložené z PAR (0,3 mmol/l), hydroxidu amónneho (150 mmol/l), hydrogenuhličitanu sodného (60 mmol/l) a hydroxidu sodného (45 mmol/l). Vzorka o...
|
|
|
Development of dispersive liquid-liquid microextraction coupled with capillary liquid chromatography for determination of fipronil and its two metabolites
Jirková, Tereza ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Horstkotte, Burkhard (oponent)
1 ABSTRAKT Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Tereza Jirková Školitelé: Dr. Francisco J. Lara prof. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D Název: Vývoj metody disperzní mikroextrakce z kapaliny do kapaliny ve spojení s kapilární kapalinovou chromatografií pro stanovení fipronilu a jeho dvou metabolitů Fipronil je fenylpyrazolový insekticid, který je zakázán pro použití u zvířat určených k produkci potravin. Tato diplomová práce navrhuje zelenou analytickou metodologii pro studium reziduí fipronilu a jeho dvou degradačních produktů, fipronil sulfonu a fipronil sulfidu. Pro jejich stanovení byla vyvinuta a validována metoda kapilární kapalinové chromatografie s UV detekcí. Korelační koeficienty nad 0,998 potvrzují dobrou linearitu. Studie opakovatelnosti s hodnotami nepřesahujícími 2,9 % RSD ukazují vysokou přesnost této metody. Pro metodu disperzní mikroextrakce kapaliny kapalinou, použitou pro přípravu vzorku, bylo optimalizováno disperzní a extrakční rozpouštědlo. Výsledky ukazují, že nejvyšší výtěžnost 82% - 92% byla získána s použitím dibrommethanu jako extrakčního činidla a acetonitrilu jako disperzního činidla. Všechny experimenty byly prováděny se standardními roztoky a v dalších studiích by tato metodika měla být přenesena na vzorky vajec nebo...
|
host ::
RSS.