|
|
Alkaloidy vybraných druhů čeledi Amaryllidaceae, jejich toxicita a biologická aktivita (in vitro studie) I.
Krejčí, Andrea ; Cahlíková, Lucie (vedoucí práce) ; Grančai, Daniel (oponent) ; Kokoška, Ladislav (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Katedra farmaceutické botaniky a ekologie Kandidát Mgr. Andrea Krejčí, roz. Kulhánková Školitel Ing. Lucie Cahlíková, Ph.D. Název disertační práce Alkaloidy vybraných druhů čeledi Amaryllidaceae, jejich toxicita a biologická aktivita (in vitro studie) I. Cibule rostlin Zephyranthes robusta a Chlidanthus fragrans byly vybrány pro fytochemické práce na základě rozsáhlé bio-guided studie za využití spektrofotometrické Ellmanovy metody a GC-MS analýz alkaloidních extraktů jako zdroj biologicky aktivních Amaryllidaceeae alkaloidů. Cibule byly extrahovány ethanolem a sumární extrakt byl separován pomocí sloupcové chromatografie za využití Al2O3 jako stacionární fáze a stupňovité eluce chloroform - ethanol. Sloupcová chromatografie, preparativní TLC a krystalizace vedly k izolaci čistých látek. Chemická struktura těchto látek byla určena na základě MS a 1D- a 2D-NMR analýz. Z čerstvých cibulí Chlidanthus fragrans bylo izolováno 11 alkaloidů, z nichž deoxypretazzetin, belladin, 3- epimakronin, ismin, undulatin, buphanisin a ambellin byly z rodu Chlidanthus izolovány poprvé. Látky byly testovány na schopnost inhibovat lidskou AChE, BuChE a POP. Z cibulí Zephyranthes robusta bylo izolováno 14 alkaloidů různých strukturních typů....
|
|
|
Úloha cytoskeletu a fosfolipidů v signalizaci obranných reakcí rostlin
Angelini, Jindřiška ; Dušková, Jiřina (vedoucí práce) ; Jahodář, Luděk (oponent) ; Grančai, Daniel (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Katedra farmaceutické botaniky a ekologie Kandidát PharmDr. Jindřiška Matoušková Školitel Doc. RNDr. Jiřina Dušková, CSc Název disertační práce Úloha cytoskeletu a fosfolipidů v signalizaci obranných reakcí rostlin Po působení abiotických nebo biotických stresových faktorů spouští rostliny současně mnoho komplexních signálních dějů, které mohou během několika hodin vyústit v účinnou obranu. Na molekulární úrovni je signalizace postupný sled velmi rychlých biochemických reakcí. Je velice těžké sledovat během interakce patogenu a rostliny jeden konkrétní signalizační děj od začátku do konce. Signální dráhy jsou vzájemně propojeny a působí, jak synergisticky, tak i antagonisticky, aby mohly jemně vyrovnávat situace, kterým je rostlina vystavena v konkrétní chvíli. Předložená práce se zaměřuje na několik složek této komplikované signální sítě, především na úlohu kyseliny salicylové, fosfatidové, změn cytoskeletu a jejich vzájemného působení, které v samotném závěru obranné reakce může vyústit ve změnu metabolomu. Mikroskopické zobrazení fluorescenčně značených proteinů v živých pletivech - live imaging - může pomoci odhalit lokalizaci a dynamiku vybraných proteinů během obranné reakce. Při obranné odpovědi probíhá mnoho...
|
|
|
Úloha cytoskeletu a fosfolipidů v signalizaci obranných reakcí rostlin
Angelini, Jindřiška ; Dušková, Jiřina (vedoucí práce) ; Jahodář, Luděk (oponent) ; Grančai, Daniel (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Katedra farmaceutické botaniky a ekologie Kandidát PharmDr. Jindřiška Matoušková Školitel Doc. RNDr. Jiřina Dušková, CSc Název disertační práce Úloha cytoskeletu a fosfolipidů v signalizaci obranných reakcí rostlin Po působení abiotických nebo biotických stresových faktorů spouští rostliny současně mnoho komplexních signálních dějů, které mohou během několika hodin vyústit v účinnou obranu. Na molekulární úrovni je signalizace postupný sled velmi rychlých biochemických reakcí. Je velice těžké sledovat během interakce patogenu a rostliny jeden konkrétní signalizační děj od začátku do konce. Signální dráhy jsou vzájemně propojeny a působí, jak synergisticky, tak i antagonisticky, aby mohly jemně vyrovnávat situace, kterým je rostlina vystavena v konkrétní chvíli. Předložená práce se zaměřuje na několik složek této komplikované signální sítě, především na úlohu kyseliny salicylové, fosfatidové, změn cytoskeletu a jejich vzájemného působení, které v samotném závěru obranné reakce může vyústit ve změnu metabolomu. Mikroskopické zobrazení fluorescenčně značených proteinů v živých pletivech - live imaging - může pomoci odhalit lokalizaci a dynamiku vybraných proteinů během obranné reakce. Při obranné odpovědi probíhá mnoho...
|
|
|
Alkaloidy vybraných druhů čeledi Amaryllidaceae, jejich toxicita a biologická aktivita (in vitro studie) I.
Krejčí, Andrea ; Cahlíková, Lucie (vedoucí práce) ; Grančai, Daniel (oponent) ; Kokoška, Ladislav (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Katedra farmaceutické botaniky a ekologie Kandidát Mgr. Andrea Krejčí, roz. Kulhánková Školitel Ing. Lucie Cahlíková, Ph.D. Název disertační práce Alkaloidy vybraných druhů čeledi Amaryllidaceae, jejich toxicita a biologická aktivita (in vitro studie) I. Cibule rostlin Zephyranthes robusta a Chlidanthus fragrans byly vybrány pro fytochemické práce na základě rozsáhlé bio-guided studie za využití spektrofotometrické Ellmanovy metody a GC-MS analýz alkaloidních extraktů jako zdroj biologicky aktivních Amaryllidaceeae alkaloidů. Cibule byly extrahovány ethanolem a sumární extrakt byl separován pomocí sloupcové chromatografie za využití Al2O3 jako stacionární fáze a stupňovité eluce chloroform - ethanol. Sloupcová chromatografie, preparativní TLC a krystalizace vedly k izolaci čistých látek. Chemická struktura těchto látek byla určena na základě MS a 1D- a 2D-NMR analýz. Z čerstvých cibulí Chlidanthus fragrans bylo izolováno 11 alkaloidů, z nichž deoxypretazzetin, belladin, 3- epimakronin, ismin, undulatin, buphanisin a ambellin byly z rodu Chlidanthus izolovány poprvé. Látky byly testovány na schopnost inhibovat lidskou AChE, BuChE a POP. Z cibulí Zephyranthes robusta bylo izolováno 14 alkaloidů různých strukturních typů....
|
|
| |
|
|
Vliv obsahových látek vybraných taxonů vyšších rostlin na trombocytární agregaci
Štejnarová, Eliška ; Opletal, Lubomír (vedoucí práce) ; Dršata, Jaroslav (oponent) ; Grančai, Daniel (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: farmaceutické botaniky a ekologie Kandidát: mgr. Eliška ŠTEJNAROVÁ Školitel: doc. RNDr. Lubomír OPLETAL, CSc. Název disertační práce: Vliv obsahových látek vybraných taxonů vyšších rostlin na trombocytární agregaci V rámci systematického výzkumu sekundárních metabolitů rostlin z čeledi Asteraceae na trombocytární antiagregační a antioxidační aktivitu byly testovány sumární extrakty z 32 druhů této taxonomické jednotky. Antiagregační aktivita byla hodnocena in vitro na lidských trombocytech v plazmě bohaté na destičky. Primární použitá koncentrace extraktů byla 500 μg ml-1 , jako agonisté agregace byly použity kyselina arašidonová (AA), adenosindifosfát (ADP), kolagen (COL) a trombin (TR). Z testovaných rostlin byla antiagregačně aktivní pouze Leuzea carthamoides (listy), inhibovala agregaci vyvolanou ADP o 33 ± 6 % a COL o 95 ± 5 %. Žádný z testovaných taxonů nevykázal proagregační působení. Z 10,5 kg sušených listů parchy saflorové byly sekvenčně připraveny extrakty; z nejaktivnějšího, chloroformového extraktu bylo sloupcovou a tenkovrstvou chromatografií izolováno 5 látek: LC-1 (cynaropikrin), LC-2 (chlorojanerin), LC-3 (repdiolid), LC-4 (jaceosidin), LC-5 (hispidulin). Antiagregační aktivita látek (IC50) byla...
|
|
|
Studium metabolizmu v in vitro kulturách Cannabis sativa L.
Peč, Jaroslav ; Dušek, Jaroslav (vedoucí práce) ; Grančai, Daniel (oponent) ; Suchý, Václav (oponent)
I. Závěr Z dostupných informačních zdrojů byl vypracován přehled obsahových látek rostliny Cannabis sativa L. se zaměřením na jejich biologickou aktivitu. Dále bylo zpracováno téma biotechnologické kultivace tkáňových kultur a aplikace moderních instrumentálních analytických metod v rámci rozvíjející se disciplíny metabolomiky. Na základě NMR a MS výsledků nebyly detekovány kanabinoidy v kontrolních nebo elicitovaných suspenzních kulturách Cannabis sativa L.. Také ostatní sekundární metabolity nebyly zaznamenány pomocí NMR. Pro úplné vyhodnocení ostatních sekundárních metabolitů, pokud byly přítomny, by bylo nezbytné využít citlivější analytické metody a jejich kombinace. Lze shrnout, že v suspenzních, kalusových a embryonálních kulturách Cannabis sativa L. nebyla s využitím elicitace pektinem nebo jasmonovou kyselinou stimulována biosyntéza kanabinoidů. Na základě kvantifikace produkovaných sloučenin a sestrojených růstových křivek byly vyhodnoceny metabolity jednotlivých růstových fází. S využítím statistické metody PCA byly vyhodnoceny důsledky elicitací s návazností na identifikaci případně objasnění struktury metabolitů. Bylo identifikováno maximum možných signálů 1 H NMR spekter a objasněny struktury u neznámých sloučenin s využitím 2D NMR. Výsledky získané z NMR měření a PCA analýz předkládají...
|
|
|
Heterologní exprese ABC transportéru v Catharanthus Roseus (L.) G. Don
Pomahačová, Barbora ; Dušková, Jiřina (vedoucí práce) ; Tůmová, Lenka (oponent) ; Grančai, Daniel (oponent)
SOUHRN předložené práci je studovaná problematika transportu jako limitujícího faktoru v biosyntéze sekundárních metabolitů rostlin. Jako modelový rostlinný systém byl vybrán Catharanthus roseus (L.) G. Don. Zástupcem aktivního transportéru byl vybrán CjMDR1, člen ABC (ATP-Binding Cassette) protein superfamily, jež je výhradním transportérem berberinu v jeho produkující rostlině, Coptis japonica. Získaná data jsou uvedena v následujících bodech. 1. Transport berberinu v nativní suspenzní kultuře katarantu růžového nevykazuje závislost na ATP a vzhledem k inhibičním studiím není substrátem pro nativní ABC transportéry katarantu. Konkrétní mechanismus transportu berberinu na vakuolární či buněčné úrovni se nepodařilo odhalit. Díky vlivu pH na plasmatické membráně na transport berberinu by se mohlo podobně jako v jiných heterologních rostlinách jednat o H+-antiport berberinu anebo effluxní přenašeč patřící do skupiny MATE (multidrug and toxic compound extrusion) (Yazaki, 2005). 2. Biolistickou metodou, mikroprojektilovým bombardováním, byla připravena transgenní kultura katarantu růžového. Transgen pocházel z matečné rostliny Coptis japonica a jednalo se o plasmatický ABC transportér. 3. U obou transgenních systémů, s chemicky indukovatelnou expresí i s konstitutivní expresí transgenu, byla studovaná intenzita...
|
|
|
Vyhledávání biologicky aktivních rostlinných sekundárních metabolitů: testy antioxidační a antiagregační aktivity
Řeháková, Zuzana ; Jahodář, Luděk (vedoucí práce) ; Semecký, Vladimír (oponent) ; Grančai, Daniel (oponent)
SOUHRN Z široké skupiny strukturně rozdílných látek přírodního původu (popř. rostlinných extraktů) a jejich syntetických analogů byly vyhledávány takové látky, které by vykazovaly výrazný antioxidační účinek a které by zároveň disponovaly jinými, terapeuticky využitelnými účinky (antiagregační aktivitou). Radikál zhášecí aktivita látek a extraktů byla měřena pomocí modifikovaného DPPH testu využívajícího programovatelného SIA (sekvenční injekční analýza) systému. Výrazný radikál zhášecí účinek vykázaly látky typu polyfenolů, zejména kyselina gallová (EC50= 0,0025 ± 0,002 mg/ml) a ethyl-gallát (EC50= 0,0038 ± 0,001 mg/ml). Také čistý latex Croton lechleri vykázal radikál zhášecí aktivitu (EC50= 0,0347 ± 0,018 mg/ml). Z testovaných methylkumarinů vykázaly excelentní antioxidační aktivitu orthodihydroxy- 4-methylkumariny, konkrétně 7,8-dihydroxy-4-methylkumarin a jeho deriváty (EC50= 24,9 ± 2,7 μM). Antioxidační aktivita byla dále testována pomocí FRAP metody modifikované za využití mikrodestiček typu P 400 μl. Z testovaných kumarinů vykázaly rovněž (stejně jako v DPPH testu) ortho-dihydroxy-4-methylkumariny výrazný antioxidační účinek. Antiagregační aktivita byla hodnocena in vitro na lidských trombocytech v plazmě bohaté na destičky (PRP, platelets rich plasma; 250×109 destiček/l). Použitá koncentrace...
|
|
|
Bioassay guided separace metabolitů vybraného rostlinného druhu - Evolvulus alsinoides
Červenka, František ; Jahodář, Luděk (vedoucí práce) ; Grančai, Daniel (oponent) ; Patočka, Jiří (oponent)
8. SOUHRN 130 Výzkumná práce ze zabývá farmakobotanickým hodnocením nadzemní cásti taxonu Evolvulus alsinoides L. Tato rostlina je soucástí prípravku s nootropním a adaptogenním pusobením. Studována byla suchá nat puvodem z Indie. Zámerem práce bylo rozšírit poznatky o obsahových látkách taxonu, posoudit biologickou aktivitu frakcí, izolovaných látek a stanovit charakteristické metabolity rostliny. V první cásti projektu byl pripraven základní extrakt z rostliny E. alsinoides. Extrakt byl rozdelen na tri základní cásti vytrepáním mezi ruzne polární rozpouštedla (petrolether, ether). Vytrepáním methanolového roztoku extraktu petroletherem byla získána frakce o hmotnosti 92,1 g. Vytrepáním vodného roztoku extraktu etherem byla získána frakce o hmotnosti 69,7 g. Zbylý extrakt byl zbaven rozpouštedla a predstavoval polární zbytek o hmotnosti 231 g. Frakce byly zpracovány metodami sloupcové chromatografie (CC). V prubehu delení extraktu byla provádena bioassay-guided separace vybraných cástí extraktu (test akutní toxicity, fototoxicity, antioxidacní aktivity, antiagregacní aktivity a antifungální aktivity). U vybraných frakcí byl stanoven obsah fenolových látek reakcí s Folin-Ciocalteuovým cinidlem. Byl také stanoven kvantitativní obsah získaných obsahových látek v celkovém extraktu HPLC a GC/FID metodami....
|
host ::
RSS.