|
|
Modifikace glutathion-S-transferasy vybranými glykačními činidly
Průchová, Zuzana ; Dršata, Jaroslav (vedoucí práce) ; Trnková, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Zuzana Průchová Školitel: Prof. MUDr. Jaroslav Dršata, CSc. Název diplomové práce: Modifikace glutathion-S-transferasy vybranými glykačními činidly Glykace je neenzymová reakce, při které dochází k vazbě karbonylových sloučenin na volné aminoskupiny aminokyselin, peptidů, proteinů či jiných biomolekul. Tento proces je úzce spjat s poškozením funkce proteinů během diabetu mellitu, v průběhu stárnutí a při neurodegenerativních onemocněních. Hlavním předmětem této diplomové práce bylo sledování vlivu několika glykačních činidel na vlastnosti enzymu glutathion-S-transferasy (GST, EC 2.5.1.18), která hraje klíčovou roli při detoxifikaci řady exogenních i endogenních sloučenin. Zvolenými modelovými glykačními činidly byly methylglyoxal (0,5-2 mM), glyceraldehyd (0,5-10 mM), glukosa (50 mM) a fruktosa (50 mM). Průběh proteinové glykace byl hodnocen pomocí následujících metod: stanovení katalytické aktivity GST, stanovení obsahu primárních aminoskupin, hodnocení tvorby AGEs za použití fluorescence a Western blottingu, vznik vysokomolekulárních cross-linků a agregátů pomocí denaturující polyakrylamidové gelové elektroforézy (SDS-PAGE), změny v náboji molekuly GST metodou nativní PAGE. V průběhu měření se...
|
|
| |
|
|
Nádorové markery
Karmazínová, Simona ; Dršata, Jaroslav (vedoucí práce) ; Skálová, Lenka (oponent)
Nádorová onemocnění jsou stará jako život sám, představují závažný celospolečenský problém a každý se s nimi už někdy setkal. Znečištěné prostředí a moderní způsob života zapříčinily, že na tyto civilizační choroby umíráme stále častěji. Nádorová onemocnění se mohou v určité formě objevit u všech vícebuněčných organismů a jejich známky byly nalezeny už u pravěkých lidí nebo u egyptských mumií. Samotné pojmenování "CANCER" pochází z antického Řecka. Laboratorní průkaz nádorového onemocnění se objevuje v odborné literatuře již v polovině 19. století. Ve stejném období dochází ke vzniku oboru klinická biochemie. V té době nebyla ještě k dispozici laboratorní technika a testování spočívalo v jednoduchých fyzikálně chemických reakcích. K velkému rozmachu studia a vyšetřování nádorových markerů dochází až ve druhé polovině 20. století. V dnešní době může stanovovat nejběžnější nádorové markery téměř každá biochemická laboratoř. Téma mé práce "Nádorové markery" je velmi široké, každá jednotlivá kapitola by si zasloužila být samostatným tématem, a tak má diplomová práce ani zdaleka nepředstavuje podrobný rozbor jednotlivých nádorových markerů, případně metod jejich stanovení. Mým cílem je poskytnout stručný přehled nejčastějších nádorových onemocnění a s tím souvisejících nádorových markerů, v...
|
|
| |
|
|
Vliv pyridoxalisonikotinoylhydrazonu na spektrální vlastnosti alaninaminotransferasy
Vančurová, Kamila ; Dršata, Jaroslav (vedoucí práce) ; Skálová, Lenka (oponent)
Obsah práce je zaměřen na sledování vlivu pyridoxaisonikotinoylhydrazonu na alaninaminotransferasu (EC 2. 6. 1. 2.). Alaninaminotransferasa patří do skupiny pyridoxalových enzymů. Jak plyne z názvu, koenzymem tohoto enzymu je pyridoxalfosfát. PIH je nestabilní in vitro a in vivo, v jeho vzorci lze rozpoznat část odpovídající pyridoxalu a isoniazidu. PIH je studován pro svou schopnost chelatovat železo. Byly také zkoumány jeho kardioprotektivní účinky využitelné při terapii kardiotoxickými antracykliny. Z podobnosti PIH s pyridoxalfosfátem pramení představa, že by PIH mohl ovlivňovat spektrální vlastnosti pyridoxalových enzymů vazbou na aktivní místo enzymu nebo i mimo něj. Jako modelový pyridoxalový enzym vhodný pro spektrální studie byla zvolena alaninaminotransferasa. Transaminasy výrazně mění spektrum v průběhu katalyzované reakce ve srovnání s dekarboxylasou aromatických aminokyselin, která byla využívána pro předchozí pokusy s PIH (Vančurová 2006, diplomová práce). Častěji v praxi využívaná transaminasa aspartátaminotransferasa nebyla pro tyto pokusy vhodná, protože absorbuje v oblasti absorpce PIHu. Proto byla s výhodou použita ALT, jejíž pyridoxalová forma absorbuje odděleně od ostatních píků. Byla měřena UV-VIS spektra a spektra cirkulárního dichroismu. Signály cirkulárního dichroismu poskytují...
|
|
|
Biologická aktivita potenciálních antioxidantů v potkaních L-6 myoblastech
Drahošová, Vlasta ; Boušová, Iva (vedoucí práce) ; Dršata, Jaroslav (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Universita Roma Tre Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra přírodních věd Katedra biochemických věd Laboratoř fyziologie Kandidát: Vlasta Drahošová Školitel: Doc. PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Prof. Sandra Incerpi Diplomová práce: Biologická aktivita potenciálních antioxidantů v potkaních L-6 myoblastech Tato diplomová práce vznikla na základě výsledků výzkumu prováděného na katedře přírodních věd Univerzity Roma Tre v Římě pod vedením profesorky Sandry Incerpi. Tým laboratoře fyziologie se dlouhodobě věnuje výzkumu různých přírodních látek s antioxidačními a cytostatickými vlastnostmi. Antioxidanty jsou schopné eliminovat reaktivní formy kyslíku (ROS), které mají v těle nezastupitelné fyziologické účinky, ale jsou také příčinnou rozvoje některých onemocnění a stárnutí díky poškození různých biomolekul. Ve své práci jsem studovala antioxidační aktivitu šesti syntetických derivátů 4-methylkumarinu (AB-3, AB-4, AB-7, AB-8, AB-11, AB-12), které byly syntetizovány a charakterizovány prof. Virinderem Parmarem (University of Delhi, Indie). Studie probíhala v buněčné linii potkaních L-6 myoblastů (stanovení intracelulárních ROS pomocí dichlorofluoresceinového testu, test proliferační křivky) a v bezbuněčném prostředí (elektronová paramagnetická resonanční spektroskopie,...
|
|
| |
|
| |
|
|
Exprese cytochromu P450 2C9 u jaterních malignit
Štěpařová, Andrea ; Dršata, Jaroslav (vedoucí práce) ; Skálová, Lenka (oponent)
1 ABSTRAKT Bc. Andrea Štěpařová Exprese cytochromu P450 2C9 u jaterních malignit Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Zdravotnická bioanalytika - Odborný pracovník v laboratorních metodách Cíl práce: Rakovina jater je celosvětově narůstajícím zdravotním problémem. Nejčastější primární malignitou jater je hepatocelulární karcinom (HCC). Jedná se o multifaktoriální onemocnění, na jehož vzniku se podílí řada faktorů genetických i negenetických, mezi něž patří především virové infekce a toxická poškození (např. vlivem abúzu alkoholu). Cytochromy P450 (CYP) se účastní různých metabolických procesů v lidském těle. Některé formy hrají roli také v patogenezi nádorových chorob. V práci je rešeršně zpracovaná problematika jaterních malignit a problematika regulace genové exprese CYP a jejich možné role v hepatokarcinogenezi a farmakoterapii HCC. U vybrané formy enzymu, CYP2C9, byla provedena analýza exprese ve vzorcích hepatocelulárního karcinomu a okolní tkáni a stanovení exprese jeho hlavních regulátorů, nukleárních receptorů pregnanového X receptoru (PXR) a konstitutivního androstanového receptoru (CAR). Metody: Vzorky tkání hepatocelulárního karcinomu a okolní nenádorové tkáně od 12 pacientů byly získány z biobanky Masarykova onkologického ústavu v Brně. Stanovení...
|
|
| |
host ::
RSS.