|
|
Separace farmaceuticky aktivních látek v multimodální a chirální chromatografii: interakční studie
Fojtíková, Sofia ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent) ; Fischer, Jan (oponent)
Během procesu vývoje léčiv spoléhá farmaceutický průmysl často na chromatografické techniky. Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) patří pro tyto účely mezi nejběžněji používané chromatografické techniky, přičemž reverzní fáze a HILIC jsou nejčastějšími volbami. Nicméně, navzdory jejich popularitě, tyto techniky mají několik nevýhod jako je příspěvek sekundárních interakcí, které vycházejí z povahy materiálu nosiče, a omezení z hlediska analýzy molekul s určitými vlastnostmi. V tomto smyslu se multimodální (také mixed-mode) chromatografie (MMC) jeví jako slibná technika, schopná řešit tyto výzvy. První část disertační práce je zaměřena na porovnání retence strukturně odlišných molekul v různých chromatografických systémech s použitím sedmi různých multimodálních stacionárních fází ve snaze objasnit interakční mechanismy, uplatňující se na jednotlivých studovaných stacionárních fázích. Na základě sledování trendů, pozorovaných za různých podmínek pro molekuly s různými fyzikálně-chemickými vlastnostmi, se to alespoň částečně podařilo. Chirální chromatografie je dalším klíčovým nástrojem v analýze farmak. Jejím hlavním účelem je při vývoji léčivých přípravků rozdělení enantiomerů tak, aby bylo možno studovat potenciálně různé bezpečnostní a účinnostní profily pro každý z enantiomerů zvlášť. Z...
|
|
|
Vývoj a testování kapilárních kolon na bázi iontoměniče
Vojta, Jiří ; Coufal, Pavel (vedoucí práce) ; Bosáková, Zuzana (oponent)
V rámci této práce byly připraveny kapilární monolitické kolony na bázi styrenu, divinylbenzenu a kyseliny methakrylové radikálovou polymerizací v křemenných kapilárách o vnitřním průměru 320 µm. Kolony byly připraveny jednoduchým postupem z polymerizačních směsí s proměnným obsahem kyseliny methakrylové. Byl prokázán vliv elektrostatických interakcí mezi kyselinou methakrylovou, jako slabým měničem kationtů, a analyty na jejich retenci. Na základě chromatografických měření byl diskutován vliv obsahu kyseliny methakrylové v polymerizačních směsích na morfologii výsledných monolitů a na retenci malých organických aminů a benzenu.
|
|
|
Modifikace a analýza nízkomolekulárních chitosanů
Moravcová, Dagmar ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Strašák, Tomáš (oponent)
3 Abstrakt Chitosan je přírodní biopolymer odvozený od chitinu, který se nachází v exoskeletonech korýšů a hub. Získal značnou pozornost díky své biologické rozložitelnosti, biokompatibilitě, antimikrobiálním vlastnostem a potenciální protinádorové aktivitě. Chitosan má kationtové aminoskupiny, které umožňují interakce s různými aniontovými sloučeninami. Proto je ideálním kandidátem pro konjugaci s monovalentními bioaktivními sloučeninami za účelem vytvoření účinných multivalentních konjugátů. Bylo zjištěno, že v nádorových buňkách dochází k nadměrné expresi galektinů, zejména Gal-1 a Gal-3. Bylo syntetizováno několik monovalentních inhibitorů odvozených od základního inhibitoru thiodigalaktosidu, modifikovaných mj. i kumarylovými skupinami, které vykazují vysokou selektivitu a afinitu vůči Gal-3. Hlavním cílem této práce bylo syntetizovat nosič na bázi chitosanu a konjugovat jej s ligandy vykazujícími selektivitu a inhibiční účinek vůči Gal-3. První krok zahrnoval modifikaci chitosanu pomocí jedinečné a efektivní metody založené na hydrolýze v pevné fázi, která výrazně snižuje spotřebu chemických materiálů a zabraňuje nadměrným ztrátám při čištění. Současně byl chitosanový nosič funkcionalizován kyselinou pentynovou. Dále byly syntetizovány monovalentní ligandy galektinů,...
|
|
|
Porovnání enantioseparace vybraných léčiv na komerčně dostupné a laboratorně připravené CSP na bázi amylosy.
Sidoryk, Edvard ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Smrček, Stanislav (oponent)
Tato bakalářská práce porovnává výkonnost dvou komerčně dostupných chirálních kolon na bázi derivatizované amylózy (amylóza-tris(3,5-dimethylfenylkarbamát), navázaná na silikagel jako nosič chirálního selektoru) s dvěma chirálními kolonami s obdobným chirálním selektorem, připravenými v laboratoři na katedře organické chemie PřF UK, ale využívajícími elektrostatický způsob kotvení na silikagel. Cílem práce bylo vyhodnotit enantioselektivitu a separační účinnost při separaci racemátů vybraných chirálních léčiv a ověřit stabilitu a reprodukovatelnost připravených kolon. Výsledky ukázaly, že komerčně dostupné chirální kolony prokázaly ve většině analýz přijatelnou enantioselektivitu a enantioseparaci, nicméně kolony připravené v laboratoři - i přes použití různorodých mobilních fází - neprokázaly dostačující separační schopnosti u žádného z testovaných analytů. Přesto byla prokázána jejich stabilita a reprodukovatelnost a ověřena tak principiální použitelnost elektrostatické vazby modifikátoru na silikagel.
|
|
|
Vývoj HPLC-MS/MS metod pro vybrané, biologicky aktivní látky
Hrabáková, Kateřina ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Tůma, Petr (oponent)
Tato diplomová práce byla zaměřena na vývoj UHPLC-MS/MS metody pro stanovení laktonové a karboxylátové formy topotekanu ve vodných pufrech (první část) a na vývoj HPLC-MS/MS metody pro sledování účinnosti extrakce 6 organických UV filtrů z vodných matric pomocí hluboce eutektických rozpouštědel a terpenů (druhá část). Topotekan je důležitým protirakovinným léčivem, které inhibuje topoizomerasu I, farmakologicky aktivní je však pouze jeho laktonová forma. V první části této práce byla studována časová změna poměru laktonové a karboxylátové formy topotekanu v závislosti na pH vzorku a na pH vodné složky mobilní fáze. K tomu byla vyvinuta 19minutová metoda UHPLC-MS/MS s C18 stacionární fází, gradientovou elucí a elektrosprejovou ionizací v pozitivním režimu. Bylo pozorováno, že se vzrůstajícím pH mobilní fáze a se vzrůstajícím pH vzorku docházelo ke zvyšování hmotnostního zlomku karboxylátové formy topotekanu ve vzorku, stejný trend byl pozorován také se vzrůstajícím časem od přípravy vzorku. U vzorku s přídavkem methanolu došlo ke stabilizaci laktonové formy a pomalejšímu přechodu na karboxylátovou formu. Tyto poznatky mohou být dále použity k optimalizaci využití topotekanu v lékařství. Účinné odstraňování organických UV filtrů z vodných složek životního prostředí a z odpadních vod je velmi...
|
|
|
Studium vybraných houbových toxinů Amanita muscaria.
Adámek, Michal ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Hložek, Tomáš (oponent)
Předkládaná bakalářská práce byla zaměřena na vývoj HPLC-MS/MS metody pro separaci a případnou kvantifikaci hlavních toxinů Amanita muscaria (muchomůrky červené). Po optimalizaci podmínek tandemové hmotnostní detekce byly nalezeny MRM přechody pro muskarin (174 → 57), kyselinu ibotenovou (159 → 113), muscimol (115 → 98) a cykloserin (103 → 75), který byl použit jako interní standard. Měření proběhlo na kolonách Luna Omega 1,6 µm polar C18 v módu RP-HPLC s optimalizovaným složením mobilní fáze 2:98 (v/v) acetonitril/deionizovaná voda s přídavkem 0,1% kyseliny mravenčí v obou složkách a Ascentis Express RP-Amide v módu HILIC s optimalizovaným složením mobilní fáze 70:30 (v/v) methanol/deionizovaná voda s přídavkem 0,5% kyseliny mravenčí v obou složkách. Za optimalizovaných podmínek byly proměřeny kalibrační křivky s rozsahem 0,01 až 10 µg/ml pro RP-HPLC a 0,01 až 25 µg/ml pro HILIC. Byly proměřeny roztoky moči a krevního séra pacienta s otravou Amanita muscaria včetně naředěných verzí těchto roztoků. V moči pacienta byla nalezena kyselina ibotenová a muscimol, v krevním séru muskarin, kyselina ibotenová a muscimol. RP-HPLC metoda poskytla užší píky s nižší retencí a nižší úrovní šumu. Byla provedena extrakce studovaných toxinů z lyofilizovaného klobouku a třeně Amanita muscaria a pomocí metody...
|
|
|
Pokročilé metody stanovení lektin-sacharidové interakce
Červený, Jakub ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Pavlíček, Jiří (oponent)
Spolehlivá a reprodukovatelná kvantifikace a podrobná charakterizace interakcí mezi biomedicínsky významným proteinem a jeho syntetickým sacharidovým ligandem může poskytnout nové informace pro návrh lepších diagnostických a terapeutických nástrojů. Vysoká citlivost a specifičnost jsou základními požadavky na proveditelnost analytické metody. Těchto parametrů může být obtížné dosáhnout u vysoce komplexních systémů, jako jsou komplexy lektin- sacharid. Na druhou stranu diagnostika a terapie na bázi sacharidů nabízí velkou výhodu detekce biologicky aktivních lektinových receptorů, které nelze dosáhnout pomocí protilátek. V této práci demonstrujeme použití techniky interferometrie na biovrstvě (BLI) ke sledování interakcí lektin-sacharid pro multivalentní systém. Pomocí funkcionalizace nového konstruktu galektinu-1 biotinylovanou značkou AVI in vivo bylo dosaženo vhodné imobilizace na biosenzoru bez ztráty lektinové aktivity. Díky vysoké citlivosti této techniky byly získány kinetické parametry interakce s připravenými multivalentními neoglykoproteiny založenými na epitopech LacNAc v rozsahu mikro- až nanomolárních KD. Komplementarita této metody byla paralelně prokázána měřením ITC a kompetitivní ELISA. Bylo zjištěno, že neoglykoprotein s nižším obsahem LacNAc má nižší KD (BLI - 230 nM; ITC - 81 nM)...
|
|
|
Stanovení estrogenních polutantů v reálné vodné matrici metodou HPLC-UV po extrakci na tuhé fázi.
Kozlík, Petr ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Coufal, Pavel (oponent)
5 Abstrakt Estrogeny patří k látkám, které negativně ovlivňují endokrinní systém již při velmi nízkých koncentracích. Tyto látky se dostávají do životního prostředí jako důsledek zvýšené konzumace řady léčiv atd. Tato práce se zabývala separací a stanovením estrogenů, jmenovitě estronu (E1), 17β-estradiolu (βE2), 17α-estradiolu (αE2), 17α-ethynylestradioul (EE2) a estriolu (E3) metodou HPLC-UV v reálné vodné matrici. Chromatografický systém se skládal z oktadecylové stacionární fáze (SunFire® C18, 150 x 4,6 mm, oktadecyl navázaný na silikagelový nosič, velikost zrnění 5 µm) a mobilní fáze obsahující acetonitril/voda v různém objemovém poměru za podmínek izokratické eluce. Byl sledován vliv obsahu acetonitrilu v mobilní fázi na retenční a separační parametry analytů. Jako nejvhodnější byla vybrána mobilní fáze ve složení acetonitril/voda 40/60 (v/v) o průtoku mobilní fáze 1,3 ml/min, zajišť ující separaci všech studovaných analytů až na základní linii a dobou analýzy nepřesahující 15 minut. Za optimalizovaných separačních podmínek byly proměřeny kalibrační závislosti jak jednotlivých estrogenů, tak jejich směsi (standardy rozpuštěné v methanolu) a vypočteny limity detekce (LOD) a limity kvantifikace (LOQ). Měření probíhala v koncentračním rozmezí 0,001 - 1 mg/ml. Hodnoty LOD se pohybovaly v rozmezí 0,40 -...
|
|
|
Analýza pigmentů z integumentu Graphosoma semipunctatum.
Krajíček, Jan ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Svobodová, Eva (oponent)
Pteriny patří do důležité skupiny látek, fungující jako pigmenty u řady druhů živočichů. Některé z nich jsou pravděpodobně zodpovědné za charakteristické zbarvení skupiny hmyzu. Toto zbarvení funguje jako varovný signál pro vizuálně se orientující predátory (ptáky, ještěrky aj.). Tato práce byla zaměřena na vývoj HPLC separační metody pro analýzu pterinů, obsažených v Graphosoma semipunctatum. Pro vývoj metody byl zvolen reverzní separační mód s C18 stacionární fází (Spherisorb ODS 2) a binární mobilní fází (organický modifikátor/fosfátový pufr nebo voda). V rámci optimalizační procedury byl sledován vliv typu a obsahu organického modifikátoru (methanol, ethanol, tetrahydrofuran) a koncentrace fosfátového pufru, pH 3,0 (10 - 30 mM) v mobilní fázi na retenční a separační chování studovaných pterinů (leukopterin, biopterin, xanthopterin, isoxanthopterin a erythropterin). Za optimalizovaných separačních podmínek (5/95 (v/v) methanol/20 mM fosfátový pufr, pH 3,0, průtoková rychlost 0,7 ml.min-1 , UV detekce při 290 nm) byl analyzován extrakt z integumentu ploštice Graphosoma semipunctatum.
|
|
|
Analýza adenosintrifosfátu a adenosindifosfátu pomocí HPLC-MS/MS
Černá, Martina ; Coufal, Pavel (vedoucí práce) ; Bosáková, Zuzana (oponent)
V této bakalářské práci byly analyzovány a detekovány vzorky adenosindifosfátu a adenosintrifosfátu pomocí metody HPLC-MS/MS. V rámci tohoto bakalářského projektu byly nalezeny orientační limity detekce (LOD) studovaných látek a tyto hodnoty byly porovnány s LOD zjištěnými v literatuře při použití stejných metod a velmi podobných experimentálních podmínek. Stanovené limity detekce nukleotidů byly srovnatelné s limity detekce v literatuře. Analýza pomocí hmotnostní spektrometrie byla prováděna při mnohonásobném reakčním monitorování v pozitivním i negativním módu a k ionizaci analytů došlo elektrosprejem. Optimálních podmínek pro analýzu ADP a ATP pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie bylo dosaženo použitím kolony ZIC - HILIC s mobilní fází o složení 75:25 (v/v) acetonitril / 10 mM octan amonný. Octan amonný měl pH nastavené na hodnotu 7,15 a dělení probíhalo při izokratické eluci.
|
host ::
RSS.