|
|
New aspects of the cell submembrane signaling
Heneberg, Petr ; Dráber, Petr (vedoucí práce) ; Bilej, Martin (oponent) ; Folk, Petr (oponent)
2 ABSTRAKT Tato disertace je příspěvkem k objasnění některých mechanismů submembránové signalizace savčích buněk. Hlavní část výzkumů byla provedena na žírných buňkách a bazofilech aktivovaných prostřednictvím vysokoafinitního receptoru pro IgE typu I, FcεRI, anebo membránovým glykoproteinem Thy-1. Jsou popsány nové role aktinového cytoskeletu v signalizaci žírných buněk přes FcεRI a Thy-1. Objev nového transmembránového adaptorového proteinu NTAL - z anglického "non-T cell activation linker" - krátce před započetím zpracovávání teze vedl ke zvýšené pozornosti věnované tomuto proteinu. Byly zjištěny a popsány významné změny v signalizaci žírných buněk s deficiencí v genu kódujícím protein NTAL, podobně též docházelo k výrazným změnám i v žírných buňkách, u kterých byla exprese proteinu NTAL jen snížena či zvýšena. Bylo dokumentováno, že NTAL je rovněž jedním z proteinů fosforylovaným po agregaci glykoproteinu Thy-1 na povrchu žírných buněk. Velká pozornost byla věnována časoprostorové distribuci glykoproteinu Thy-1 na různých úrovních rozlišení, přičemž byly zkoumány i některé biochemické charakteristiky buněk aktivovaných právě přes Thy-1 glykoprotein. V žírných buňkách a bazofilech byla zjišťována přítomnost dosud neznámých nereceptorových proteinových tyrosinových fosfatáz a následně byla provedena...
|
|
|
Effects of microbiota on defense system of earthworms
Dvořák, Jiří ; Bilej, Martin (vedoucí práce) ; Kopečný, Jan (oponent) ; Horák, Petr (oponent)
Žížaly patří mezi významné půdní bezobratlé živočichy. Přispívají ke koloběhu živin v půdních ekosystémech a podílí se na tvorbě půd ovlivňováním jak fyzikálně chemických tak mikrobiálních procesů. Půdy jsou nejvíce mikrobiálně různorodým prostředím na Zemi. Půdní bezobratlí proto musí mít dobře vyvinutý imunitní systém. Žížaly se používají jako modelový organismus pro studium imunitních procesů několik desítek let. Mají jednoduchou stavbu těla. Její základní schéma je založeno na trávicí trubici, která leží uvnitř dutiny coelomu. Obě dutiny jsou otevřené vůči vnějšímu prostředí, a z toho důvodu obsahují mikroorganismy. V naší laboratoři používáme mnoho let jako imunologický model druh žížaly Eisenia andrei. Přirozeným prostředím těchto žížal je kompost obsahující velké množství mikroorganismů, a proto mají dobře vyvinutý imunitní systém. Objasnění nových obranných mechanismů tohoto druhu je předmětem této práce. Popsali jsme dva nové receptory rozpoznávající vzory u žížal, a sice Toll-like receptor (TLR) a protein rozpoznávající lipopolysacharid (LBP/BPI). Obě tyto molekuly jsou produkovány coelomocyty a jejich exprese se zvyšuje po mikrobiální stimulaci. Tyto receptory se také exprimují v trávicím traktu. Střevo žížal obsahuje mnohem více bakterií v porovnání s coelomem. Slizniční imunitní systém...
|
|
|
Critical factors affecting pathogen development in sand flies
Jančářová, Magdaléna ; Volf, Petr (vedoucí práce) ; Ratinier, Maxime (oponent) ; Bilej, Martin (oponent)
Tato práce se zabývá bariérami a kritickými faktory při vývoji virů, leishmanií a gregarin během vývoje ve flebotomovi. Nejdříve jsme se zaměřili na vývojový cyklus virů přenášených flebotomy, jelikož dodnes není jasné, jak tyto viry dokážou kolovat v přírodě. Pro studium této problematiky jsme si zvolili Massilia virus (MASV), který je blízce příbuzný Toscana viru, hlavnímu původci meningitidy v Mediteránu během letních měsíců. Zkoušeli jsme různé způsoby nákazy Massilia virem u různých vývojových stádií flebotoma druhu Phlebotomus pernicisous a to infekci: (i) prvního a čtvrtého larválního instaru z larvální potravy, (ii) samic krví a (iii) obou pohlaví cukrem. Infekce larev z potravy a následný transstadiální přenos MASV na dospělce byl neefektivní; celkem se z larev vyvinulo 875 dospělců a pouze tři z nich byli MASV pozitivní. Po nákaze samic z krve jsme sice na počátku získali vysoké procento infikovaných jedinců, nicméně po defekaci došlo k eliminaci infekce a počet infikovaných samic poklesl na 5 z 27. Jako nejúčinnější způsob infekce MASV jsme prokázali nákazu z cukru; 72 % samic (88 ze 122) a 51 % samců (58 ze 113) bylo MASV pozitivní. Navíc, takto infikovaní flebotomové kontaminovali virem cukr, který díky tomu sloužil jako zdroj nákazy pro naivní jedince během následujících 24 hodin;...
|
|
|
Koinfekce leishmanií a gregarin u flebotomů
Jančářová, Magdaléna ; Volf, Petr (vedoucí práce) ; Bilej, Martin (oponent)
Tato diplomová práce se skládá ze dvou vzájemně navazujících částí. První část se zabývá vlivem gregariny Psychodiella sergenti na náchylnost flebotoma Phlebotomus sergenti vůči experimentální nákaze Leishmania tropica. Při srovnání turecké kolonie P. sergenti infikované gregarinou a izraelské kolonie bez gregarin jsme u turecké kolonie prokázali signifikantně vyšší intenzitu infekce L. tropica druhý a desátý den po infekčním sání a rychlejší kolonizaci stomodeální valvy promastigoty. Tyto rozdíly však zřejmě nejsou způsobeny gregarinou, ale vnitrodruhovou variabilitou P. sergenti nebo rozdílným složením střevní mikroflory u obou kolonií. U dvou kolonií P. sergenti původem z Izraele (jedna infikovaná gregarinami, druhá nikoli) jsme žádný signifikantní rozdíl nezaznamenali; kolonie se nelišily v procentu infikovaných samic, intenzitě infekce ani v lokalizaci promastigotů L. tropica. V druhé části mé diplomové práce byly pomocí degenerovaných primerů navržených na základě sekvencí imunitních molekul z Phlebotomus papatasi a Lutzomyia longipalpis a následného klonování produktů pomocí pGEM®-T Easy Vector Systems získány sekvence čtyř imunitních molekul P. sergenti: cekropinu, serpinu, TEPu (thiolesther containing proteins) a PGRP - LB (peptidoglycan recognition protein). Pomocí qPCR byla měřena...
|
|
| |
|
|
Molekulárna charakterizácia vybraných obranných faktorov v čeľadi Lumbricidae
Mančíková, Veronika ; Bilej, Martin (vedoucí práce) ; Král, Jiří (oponent)
Dáždovky patriace medzi máloštetinavce sú modelom porovnávacej imunológie už viac ako 40 rokov. Sú schopné efektívne rozpoznať a reagovať na nevlastné látky vďaka rôznym obranným mechanizmom, medzi ktoré sa zahrňujú aj molekuly s mnohými biologickými aktivitami zahrňujúcimi cytolytické, antimikróbne a proteolytické. Táto práca je zameraná na porovnanie imunologických vlastností dvoch blízkych druhov dážďoviek Eisenia andrei a Eisenia fetida. Vďaka mnohým podobnostiam medzi ich morfológiou a životnými cyklami boli až donedávna považované za členov poddruhu. Zaujímavým však je, že sa ich prirodzené prostredia života od seba veľmi líšia, a preto bolo veľmi zaujímavé skúmať aký vplyv majú rozdiely v prostredí na vlastnosti prirodzenej imunity oboch druhov. Kľúčové slová: dážďovky, prirodzená imunita, Eisenia andrei, Eisenia fetida, CCF, fetidín, lysenín, lyzozým
|
|
|
Antigenic and enzymatic properties of sand fly saliva
Hostomská, Jitka ; Volf, Petr (vedoucí práce) ; Salát, Jiří (oponent) ; Bilej, Martin (oponent)
i SUMMARY OF RESULTS The thesissumsup the resultsof threeprojectsI was involvedin duringmy PhD study.Specifically, I adressedthe putativeeffect of sand fly salivary hyaluronidaseon transmissionandestablishmentof kishmania infection.The secondprojectwasdealingwith thekineticsof anti-salivaantibodyresponsein dogsexposedto Lutzomyialongipalpissutd flies andwith the characterizationof salivaryantigensrecognizedby thesedogs.Finally, I constructedand annotateda cDNA library from Phlebotomusarabicas and characterized P. arabicus sďivary antigensreactingwith arrtibodiesof mice exposedto this sand fly species.Theresultsofthe projectsaÍebrieflyoutlinedhere. We detectedhyaluronidaseactivity in saliva of various bloodsuckingDipter4 includingsandflies. In coinoculationexperimentswith BALB/o mice we proveda positive conelationbetweenthe size of the cutaneouslesion causedby Leishmaniamajor andthe presenceofhyaluronidasein theinfectiveinoculum.In hyďuronidase-coinoculatedmice,the lesionsweresigniÍicantlylargerfromweek3 postinfection(infectiondosel05 parasites)or week 4 (infection dose 10"). On the other hand, hyaluronidasedid not affect early viscerďizationof L. majorat24 hrspostinfection.Thus,we demonstratedthathya|uronidase promotes Leishmania establishment in murine skin and we hypothesize that immunomodulatoryeffectsof...
|
|
| |
|
| |
|
|
Molecular mechanisms of regulation of FcɛRI signaling in mast cells
Bambousková, Monika ; Dráber, Petr (vedoucí práce) ; Černý, Jan (oponent) ; Bilej, Martin (oponent)
SOUHRN Žírné buňky tvoří důležitou součást imunitního systému. Při patologických situacích jsou aktivovány a jsou zodpovědné za alergické reakce. Detailní poznání molekulárních mechanismů vedoucích k jejich aktivaci je proto důležité zejména pro vývoj nových postupů v léčbě alergických reakcí. Nejdůležitějším transmembránovým receptorem žírných buněk je vysokoafinitní Fc receptor pro IgE (FcεRI). FcεRI váže IgE na plasmatické membráně. Po prokřížení polyvalentním antigenem, imunoreceptorové tyrosinové aktivační motivy (ITAM) v intracelularní části receptrou jsou fosforylovány a spouští se signální dráha vedoucí k buněčné aktivaci. Signalizace přes FcεRI po vazbě antigenu je kriticky závislá na interakci s intracelularními protein-tyrosinovými kinasami, které zprostředkovávají fosforylaci ITAM motivů, a zároveň na mnoha dalších komponentách signalizační dráhy. Tato práce byla soustředěna na studium signalizačních procesů vedoucích k aktivaci žírných buněk na několika různých úrovních s důrazem na rané fáze signalizace přes FcεRI. Nejprve jsme se zaměřili na roli protein-tyrosinových fosfatas (PTP) při inicializaci fosforylace FcεRI. Podařilo se nám ukázat, že aktivace FcεRI antigenem vede k oxidaci tyrosinu v aktivním místě PTP a tudíž k jejich inhibici. Topografie inaktivních PTP na plasmatické membráně...
|
host ::
RSS.