|
|
Monitoring of protein network dynamics: the role of FcRL proteins during sperm-egg membrane interaction
Bašus, Kryštof ; Komrsková, Kateřina (vedoucí práce) ; Šušor, Andrej (oponent)
Vzájemná interakce a fúze membrán spermie a vajíčka je zprostředkována různými molekulami, které se nacházejí na membáně spermie i vajíčka a tvoří proteinové sítě. U mnoha kandidátních proteinů byla předpokládána jejich účast při fúzi membrán gamet, některé z těchto proteinů (Izumo1, CD9, Juno) se ukázaly býti nezbytnými, zatímco u jiných byla objevena zcela jiná role (CD46, tetraspaniny). U myši se po vazbě spermie na vajíčko váže protein Juno na povrchu vajíčka na monomerní protein Izumo1 na povrchu spermie, následuje dimerizace Izumo1 a rychlé vyvázání proteinu Juno z povrchu vajíčka, jak bylo popsáno u myši. Tato skutečnost naznačuje, že pro zajištění fúze membrán musí být na vajíčku exprimován další, zatím nespecifikovaný receptor. Abychom nalezli hlavní lidský fúzogenní receptor pro IZUMO1, využili jsme metodu náhodného screeningu, jedna kulička - jedna sloučenina" (one--bead one compoud, OBOC). Byla vybrána kulička interagující s lidskými spermiemi za splnění všech kritérií a tato kulička nesla navázanou peptidovou sekvenci homologní s Ig doménou ...
|
|
|
Monitoring of protein network dynamics: the role of FcRL proteins during sperm-egg membrane interaction
Bašus, Kryštof ; Komrsková, Kateřina (vedoucí práce) ; Šušor, Andrej (oponent)
Vzájemná interakce a fúze membrán spermie a vajíčka je zprostředkována různými molekulami, které se nacházejí na membáně spermie i vajíčka a tvoří proteinové sítě. U mnoha kandidátních proteinů byla předpokládána jejich účast při fúzi membrán gamet, některé z těchto proteinů (Izumo1, CD9, Juno) se ukázaly býti nezbytnými, zatímco u jiných byla objevena zcela jiná role (CD46, tetraspaniny). U myši se po vazbě spermie na vajíčko váže protein Juno na povrchu vajíčka na monomerní protein Izumo1 na povrchu spermie, následuje dimerizace Izumo1 a rychlé vyvázání proteinu Juno z povrchu vajíčka, jak bylo popsáno u myši. Tato skutečnost naznačuje, že pro zajištění fúze membrán musí být na vajíčku exprimován další, zatím nespecifikovaný receptor. Abychom nalezli hlavní lidský fúzogenní receptor pro IZUMO1, využili jsme metodu náhodného screeningu, jedna kulička - jedna sloučenina" (one--bead one compoud, OBOC). Byla vybrána kulička interagující s lidskými spermiemi za splnění všech kritérií a tato kulička nesla navázanou peptidovou sekvenci homologní s Ig doménou ...
|
|
|
Vizualizace RNA a její translace v savčím oocytu
Bašus, Kryštof ; Tětková, Anna (vedoucí práce) ; Macůrková, Marie (oponent)
Translace je jeden ze základních biologických procesů. Předpokládá se, že lokalizace mRNA a její translace v určitý čas a na konkrétních místech hraje roli při mnoha buněčných pro- cesech. Savčí oocyt se po dosažení své plné velikosti stává transkripčně inaktivním a využívá pouze RNA nasyntetizované a uložené v raných fázích vývoje. Regulace syntézy proteinů na úrovni translace je tedy klíčová pro správné dokončení meiotického zrání oocytů a při časném vývoji embryí. Pro monitorování buněčné fyziologie je nutné umět vizualizovat a sledovat konkrétní molekuly a procesy na úrovni jednotlivých buněk. To je umožněno vývojem světelné mikrosko- pie a fluorescenčních sond, které se specificky váží na určité organely, buněčné struktury, pro- teiny nebo jiné molekuly. V této práci popisuji vybrané metody vizualizace RNA, globální trans- lace i translace specifických transkriptů a hotových proteinů. Metody, kterými se tato práce zabýva jsou RNA FISH, vizualizace translace pomocí analogů methioninu, FUNCAT, SUnSET, FlAsH, ReAsH, TRICK, SINAPS, FUNCAT-PLA, PURO-PLA. Klíčová slova: Translace, RNA, Protein, Vizualizace, Oocyt
|
host ::
RSS.