|
|
Vývoj metody pro stanovení 8-hydroxy-2-deoxy guanosinu v moči pro klinický výzkum
Šestáková, Veronika ; Kujovská Krčmová, Lenka (vedoucí práce) ; Matysová, Ludmila (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Veronika Šestáková Školitel: doc. RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj metody pro stanovení 8-hydroxy-2-deoxy guanosinu v moči pro klinický výzkum Tato diplomová práce se zabývá vývojem metody pro stanovení 8-hydroxy-2-deoxy guanosinu, 8-hydroxyguanosinu a kreatininu pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Cílem bylo vytvořit optimální chromatografické podmínky pro klinický výzkum. Experimenty byly prováděny na přístroji UHPLC Nexera, (Shimadzu, Japonsko) s hmotnostním spektrometrem LCMS-8030 (Shimadzu, Japonsko). Byly testovány 2 stacionární fáze. K separaci byla použita kolona Meteoric core C18 BIO o rozměrech 4,6 × 50 mm (YMC, Německo) s povrchově porézními částicemi o velikosti 2,7 μm opatřena předkolonou KrudKatcher Ultra 0,5 μm in-line filtr (Phenomenex, Německo). Mobilní fáze byla připravena z vody (pH 3 upravené pomocí kyseliny octové) a methanolu (s přídavkem kyseliny mravenčí - 0,2 mM) v poměru 90 : 10. Teplota byla nastavena na 25 řC, průtok na 0,5 ml/min a nástřik zvolen 4 µl. Po optimalizaci separačních podmínek byla metoda aplikována na biologickou matrici (moč). Vzorky byly upraveny extrakcí na tuhou fázi. Metoda byla validována. Nová metoda bude...
|
|
|
Porovnání částicových stacionárních fází s monolitickými při analýze vybraných farmaceutik
Šestakova, Veronika ; Chocholoušová Havlíková, Lucie (oponent) ; Matysová, Ludmila (vedoucí práce)
Tato práce se zabývá porovnáním analytické účinnosti monolitických kolon Chromolith® (Merck) a Onyx™ (Phenomenex) s konvenčními C18 kolonami Discovery® (Supelco, Sigma-Aldrich, Praha, ČR) a LiChroCart® 125-4 Purospher 5 µm (Merck, Darmstadt, Německo) při stanovení obsahu estradiolu, estronu a hydrokortizonu (IS) v LP Estrogel gelu a při stanovení obsahu kyseliny salicylové, methylsalicylátu a ketoprofenu (IS) v přípravku Aphlox-K pasta. Složení mobilní fáze (pro analýzu Estrogel gelu je mobilní fáze složena z acetonitrilu, methanolu a vody v poměru 23:24:53 (v/v/v) a pro analýzu Aphlox-K pasty je mobilní fáze složena z methanolu, vody a kyseliny octové v poměru 50:50:1 (v/v/v) - tento poměr jednotlivých složek mobilní fáze je optimální pro dosažení potřebného rozlišení mezi jednotlivými píky). Toto složení mobilní fáze nebylo většinou vhodné pro analýzu na všech zkoušených kolonách. Proto byly poměry jednotlivých složek mobilní fáze měněny pro dosažení potřebného rozlišení mezi analyzovanými látkami (obvykle byl zvyšován podíl vody v mobilní fázi). Byly měněny i rychlosti průtoku mobilní fáze (od 0,3 - 5,0 ml/min). Bylo provedeno stanovení účinných látek, konzervačních látek, nečistot v obou přípravcích a následně byly porovnány jednotlivé retenční časy a parametry SST. Pro Estrogel gel byly nalezeny...
|
|
|
Využití HPLC ve farmaceutické analýze
Šestakova, Veronika ; Chocholoušová Havlíková, Lucie (oponent) ; Matysová, Ludmila (vedoucí práce)
Stanovení obsahu hexachlorofenu v léčivém přípravku SEPTONEX mast se na katedře analytické chemie provádí pomocí HPLC. Tato metoda má řadu výhod oproti dříve používanému titračnímu stanovení. Podmínky analýzy jsou následující: mobilní fáze je složena z 85 % metanolu s přídavkem 1% kyseliny octové, kolona Purospher Merck RP C18, 5 µm (12,5 cm x 4 mm), průtoková rychlost mobilní fáze je 1,5 ml/min, objem nástřiku vzorku je 20 µl. Snahou bylo optimalizovat používanou metodu, tzn. nalézt kolonu, využívající moderní trendy v HPLC, která by umožňovala získávat přesné, rychle a dobře reprodukovatelné výsledky za podobných chromatografických podmínek. Na základě literární rešerše bylo vybráno šest různých analytických kolon s více či méně podobnými charakteristikami jako kolona dosud používaná. Na každé z těchto kolon byly změřeny roztoky standardů hexachlorofenu a roztoky vzorků masti SEPTONEX při různých rychlostech průtoku mobilní fáze. Ostatní podmínky analýzy zůstaly zachovány. Z experimentu vyplynulo, že z vyzkoušených kolon je nejvhodnější kolona Chromolith Performance RP18-e (10 cm x 4,6 mm) při rychlosti průtoku mobilní fáze 2,0 ml/min. Dalším úkolem bylo nalézt vhodný vnitřní standard pro rychlejší a přesnější stanovení hexachlorofenu v léčivém přípravku SEPTONEX mast. Některé testované látky byly vybrány...
|
host ::
RSS.