Original title: Příprava rekombinantních protilátek s využitím metod proteinového inženýrství
Translated title: Protein engineering as a tool for the production of antibody derivatives
Authors: Šulc, Josef ; Bařinka, Cyril (advisor) ; Mikulecký, Pavel (referee)
Document type: Bachelor's theses
Year: 2019
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
Tato práce popisuje tvorbu a vlastnosti disulfidicky stabilizovaného variabilního fragmentu protilátky 5D3 specificky rozpoznávající glutamátkarboxypeptidasu II, antigen úzce související s karcinomem prostaty i jinými nádorovými onemocněními. Malé protilátkové deriváty jsou v současnosti masivně využívány pro vývoj diagnostických a terapeutických nástrojů. Některé typy těchto derivátů však vykazují sníženou stabilitu terciární struktury, což může vést k nízkému výtěžku při produkci anebo ke zhoršení až ztrátě funkce proteinu. Tento problém je často řešen zaváděním strukturních změn pomocí proteinového inženýrství. Cílem práce bylo zavedení interdoménového disulfidického můstku do struktury jednořetězcového variabilního fragmentu protilátky za účelem zvýšení jeho stability. Vliv zavedené modifikace na stabilitu proteinu byl posuzován z hlediska výtěžku purifikovaného proteinu a jeho afinity k antigenu. Vyvíjený protilátkový derivát byl produkován v prokaryotickém expresním systému Escherichia coli s využitím signální sekvence směřující produkovaný derivát do periplasmatického prostoru. Snaha o stabilizaci proteinu probíhala pomocí mutageneze na pozicích G44 variabilní domény těžkého řetězce a G100 variabilní domény lehkého řetězce záměnou glycinů za cysteiny. Charakterizace purifikovaného proteinu proběhla s... This thesis deals with production and properties of disulfide-stabilized single-chain variable fragments of the 5D3 antibody (dsscFv), which specifically recognizes and binds to glutamate carboxypeptidase II (GCPII), an antigen closely related to the prostate carcinoma processes and other tumor diseases. Small antibody fragments are in current focus of development of diagnostic and therapeutic reagents. However, compromised stability of antibody derivatives often results in low production yield or loss of function. Introduction of structural changes by protein engineering is often used to solve the issue. The aim of the study was based on enhancement of protein stability by the introduction of interdomain disulfide bond into the structure of single-chain variable fragment. The effect of modification was evaluated by estimation of production yield and affinity of studied protein. The aforementioned antibody derivative was produced using an Escherichia coli expression system, using specific signal sequences leading the production to the bacterial periplasm. The attempted stabilization was carried out by introducing mutations at LV-G44 and HV-G100 positions, replacing glycines with cysteines. The binding affinity of the derivative for human GCPII was determined using ELISA. This thesis also shows a solved 3D...
Keywords: 5D3; antibody engineering; antibody fragments; dsscFv; GCPII; prostate carcinoma; PSMA; scFv; 5D3; dsscFv; fragmenty protilátek; GCPII; karcinom prostaty; protilátkové inženýrství; PSMA; scFv

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/107070

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-397671


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Bachelor's theses