Original title: Stanovení nízkomolekulárního heparinu pomocí afinitní kapilární elektroforézy
Translated title: Determination of low-molecular-mass heparin using affinity capillary electrophoresis
Authors: Molnárová, Katarína ; Křížek, Tomáš (advisor) ; Sobotníková, Jana (referee)
Document type: Master’s theses
Year: 2019
Language: slo
Abstract: [eng] [cze]
Unfractionated heparin, which is a widely used anticoagulant, is frequently replaced with low-molecular-mass species. They are used due to their more predictable anticoagulant effect with less bleeding complications and also they have prolonged anticoagulant effect. For monitoring of low-molecular-mass heparin levels, anti-factor Xa assay is used, which has some significant drawbacks. This work is dedicated to determination of low-molecular-mass heparin, namely Fraxiparine, using affinity capillary electrophoresis. Heparin is a polysaccharide which does not exhibit a significant UV absorption; therefore, its indirect detection method was used. Fraxiparine forms a stable complex with protamine. Protamine is an arginine-rich, positively charged peptide which is used to suppress heparin anticoagulant effect. Because protamine has a complex, not precisely defined structure, it was replaced by well-defined tetraarginine. The method uses phosphoric acid of 9 mmol L-1 concentration with addition of 0.1% (w/v) hydroxyethylcellulose as the background electrolyte. The samples are injected hydrodynamically into the capillary by a pressure of 5 kPa. First, the zone of Fraxiparine was injected, followed by the zone of tetraarginine (5 s). After that, 30 kV voltage was applied for 30 s. During this time the... Štandardný heparín, klinický antikoagulant, je v praxi čoraz častejšie nahradený nízkomolekulárnymi heparínmi. Tie sa používajú kvôli lepším biologickým vlastnostiam, medzi ktoré patrí lepšie predvídateľný antikoagulačný účinok, menej krvácavých komplikácií a lepšia biologická dostupnosť. Hladina nízkomolekulárnych heparínov v krvi je zvyčajne stanovená anti-Xa testom. Toto stanovenie však naráža na isté nedostatky. Táto práca sa venuje stanoveniu nízkomolekulárneho heparínu, Fraxiparínu, pomocou afinitnej kapilárnej elektroforézy. Pretože heparíny sú polysacharidy, ktoré významne neabsorbujú v UV oblasti, ich priama detekcia je náročná. Z toho dôvodu v rámci tejto práce bola použitá nepriama detekcia Fraxiparínu, pričom bola využitá jeho schopnosť tvoriť komplex s protamínom - antidotum heparínu. Protamín je pozitívne nabitý peptid, ktorý má zložitú štruktúru, jeho hlavnou zložkou je však arginín. Z toho dôvodu bol, z účelu stanovenia Fraxiparínu, protamín nahradený tetraarginínom, ktorý má dobre definovanú štruktúru. Základným elektrolytom bola kyselina fosforečná s koncentráciou 9 mmol l-1 s prídavkom 0,1% (w/v) hydroxyetylcelulózy. Základné experimentálne usporiadanie používalo zónové dávkovanie, pričom jednotlivé zóny boli nadávkované tlakom 5 kPa. Ako prvá bola nadávkovaná zóna Fraxiparínu,...
Keywords: affinity interactions; capillary electrophoresis; low-molecular-mass heparin; afinitná interakcia; kapilárna elektroforéza; nízkomolekulárny heparín

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/106481

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-396698


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Master’s theses