Název:
Molekulární a sérologická diagnostika nákaz trichobilharziemi
Překlad názvu:
Molecular and serologic diagnosis of infections caused by Trichobilharzia
Autoři:
Vaščiková, Michaela ; Horák, Petr (vedoucí práce) ; Ditrich, Oleg (oponent) Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok:
2015
Jazyk:
slo
Abstrakt: [eng][cze] Cercariae of the genus Trichobilharzia can penetrate not only the skin of definitive hosts (ducks), but they are also able to penetrate the skin of accidental hosts (mammals). As a result of the penetration, the inflammatory response known as cercarial dermatitis appears. The goal of our thesis is to detect parasite DNA in the serum and cerebrospinal fluid of infected ducks, and also in the serum of infected mice. By using PCR with primers designed for a tandem repeated sequence, we were able to detect 1 femtograms of parasite DNA isolated from sera of infected ducks. We were able to amplify parasite DNA only from 16 samples of sera and cerebrospinal fluid of the infected ducks, but we were not able to do so with the serum of mice. Sera of infected mice were also tested by ELISA and Western blot. The homogenates of T. regenti (TRhc), T. szidati (TShc) and S. mansoni (SMhc) cercariae were selected as an antigen. The results showed progressive increase in the level of IgM antibody from 10 days after 1st infection and also increase of the level of IgG from the 2nd infection. 10 days after the 4th infection, the level of IgM and IgG gradually declined, but the level of antibodies 100 days after the 4th infection was still higher if compared to uninfected mice. Results from Western blot analysis...Cerkárie rodu Trichobilharzia penetrujú nie len do kože definitívneho hostiteľa (vodné vtáctvo), ale aj do kože náhodných hostiteľov (cicavce). Dôsledkom penetrácie je vznik hypersenzitívnej reakcie nazývanej cerkáriová dermatitída. Cieľom práce bolo detegovať parazitárnu DNA zo séra a mozgomiešneho moku infikovaných kačiek, tiež zo séra infikovaných myší. Pomocou PCR s primermi pre tandemovo repetitívnu sekvenciu sme boli schopní zachytiť 1 fg parazitárnej DNA izolovanej zo séra infikovaných kačiek. Parazitárnu DNA sa nám podarilo amplifikovať iba u 16 vzoriek séra a likvoru kačiek, ale nie zo sér myší. Ďalej boli myšie séra testované ELISA a Western blot metódou, a to za použitia antigénu homogenátu cerkárií T. regenti (TRhc) , T. szidati (TShc) a S. mansoni (SMhc). Výsledky ukazujú na progesívny nárast hladiny IgM protilátok, ktorý bol viditeľný od 10 dní prvej infekcie a nárast hladiny IgG protilátok až od druhej reinfekce. Po 10 dňoch od štvrtej reinfekcie hladina oboch protilátok v sére postupne klesala, ale ešte 100 dní od štvrtej reinfekcie bola hladina protilátok vyššia ako u negatívnych sér. Výsledky z Western blotu ukazujú, že IgG a IgM protilátky v homológnom sére rozpoznávali antigény 21 a 22 kDa z TRhc. V homológnom sére IgG protilátky rozpoznávali antigén 26 kDa z TShc a IgM...
Klíčová slova:
helminti; molekulární diagnostika; sérologie; Trematoda; Trichobilharzia; helminths; molecular diagnosis; serology; Trematoda; Trichobilharzia