Název: Stanovení protaminů kapilární zónovou elektroforézou
Překlad názvu: Capillary zone electrophoresis determination of protamines
Autoři: Malý, Michal ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Kubíčková, Anna (oponent)
Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok: 2015
Jazyk: cze
Abstrakt: [cze] [eng]
Tato práce se zabývá vývojem a optimalizací metody pro separaci a detekci protaminů s využitím ka- pilární zónové elektroforézy. Vyvinutá metoda používá křemennou kapiláru o vnitřním průměru 50 µm a efektivní délce 41,5 cm. Separace probíhá při napětí 30 kV. Pracovním elektrolytem je vodný roztok ky- seliny fosforečné o koncentraci 45 mmol dm−3 . Analyt je detekován spektrofotometricky při vlnové délce 200 nm. Vzorek je dávkován hydrodynamicky. Metodou je možné stanovit protaminy v rozsahu koncent- rací 11 µg ml−1 až 1000 µg ml−1 , mez detekce je 4 µg ml−1 . Praktická použitelnost metody byla ověřena na reálném vzorku injekce NPH insulinu. Pro dostatečně citlivou detekci protaminů v NPH insulinu je nutné vzorek připravit v dostatečně kyselém prostředí. Pro účely této práce byl vzorek okyselen přídavkem roztoku pracovního elektrolytu tak, aby jeho koncentrace ve výsledném roztoku vzorku byla 18 mmol dm−3 . Hlavní výhodou metody je vysoká rychlost, migrační čas analytu je zhruba 2 min. Nevýhodou v porovnání s alter- nativními metodami využívajícími CZE nebo RP-HPLC je neschopnost separovat jednotlivé protaminové peptidy. Pro stanovení celkového protaminu ve vzorku toto však nepředstavuje zásadní nedostatek. 1 This work deals with development and optimization of a method for separation and detection of pro- tamines using capillary zone electrophoresis. The developed method uses a fused silica capillary with inner diameter of 50 µm and effective length of 41,5 cm. Driving voltage is 30 kV. Background electrolyte is aque- ous solution of 45 mmol dm−3 phosphoric acid. Analyte is detected spectrophotometrically at wavelength of 200 nm. Sample is injected hydrodynamically. The method allows for determination of protamines in the concentration range between 11 µg ml−1 to 1000 µg ml−1 , limit of detection is 4 µg ml−1 . Viablity of the method has been verified with a real sample of NPH insulin injection. For sufficiently sensitive detection of protamines in NPH insuline it is necessary to prepare the sample in acidic environment. For the pur- poses of this work the sample was acidified by addition of background electrolyte into the sample so that the background electrolyte concentration in the resulting solution of the sample was 18 mmol dm−3 . The main advantage of the method is the rapid analysis, migration time of the analyte is about 2 min. Disadvantage of the method in comparison to alternate methods using CZE or RP-HPLC is the inability to separate individ- ual protamine peptides. This disadvantage...
Klíčová slova: kapilární zónová elektroforéza; NPH insulin; protaminy; capillary zone electrophoresis; NPH insulin; protamines

Instituce: Fakulty UK (VŠKP) (web)
Informace o dostupnosti dokumentu: Dostupné v digitálním repozitáři UK.
Původní záznam: http://hdl.handle.net/20.500.11956/82059

Trvalý odkaz NUŠL: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-351753


Záznam je zařazen do těchto sbírek:
Školství > Veřejné vysoké školy > Univerzita Karlova > Fakulty UK (VŠKP)
Vysokoškolské kvalifikační práce > Diplomové práce