Název: Příprava a charakterizace neutrální trehalasy pro strukturní studie
Překlad názvu: Preparation and characterization of neutral trehalase for structural studies
Autoři: Šmídová, Aneta ; Obšilová, Veronika (vedoucí práce) ; Jiráček, Jiří (oponent)
Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok: 2016
Jazyk: cze
Abstrakt: [cze] [eng]
Předkládaná diplomová práce je součástí projektu, jehož cílem je vyřešení struktury trehalasové domény neutrální trehalasy Nth1 pocházející ze Saccharomyces cerevisiae. Hlavním cílem této diplomové práce je příprava nových konstruktů kvasničné Nth1 a optimalizace jejich purifikačních protokolů, dále pak výběr nejvhodnějšího pufru pro hledání krystalografických podmínek pomocí metody diferenční skenovací fluorimetrie (DSF) a následná krystalizace připraveného proteinu. Další částí diplomové práce je stanovení enzymové aktivity Nth1 WT a jejích mutantních forem za přítomnosti proteinu Bmh1, dále pak ověření vazby trehalosy na vybrané konstrukty Nth1 pomocí DSF a mikrotermoforézy (MST) a následná krystalizace s trehalosou. Neutrální trehalasa se řadí mezi vysoce konzervované trehalasy, které byly objeveny v široké škále organismů. Tyto enzymy patří do třídy hydrolas, podskupiny glykosidas, hydrolyticky štěpí molekulu trehalosy na dvě molekuly glukosy. Trehalosa je přirozeně se vyskytující neredukující disacharid, který slouží v buňkách kvasinek jako zdroj uhlíku a energie a dále jako ochrana před stresy jako je např. tepelný šok. Hydrolýza trehalosy je životně důležitá pro létavý hmyz, neboť je přítomná jako hlavní cukerná složka hemolymfy hmyzu, proto inhibitory trehalas mohou být využity jako... This study is part of a project which aim is solving the structure of the catalytic domain of neutral trehalase Nth1 from Saccharomyces cerevisiae. The main goal of this thesis is the preparation of new constructs of yeast Nth1 and optimization of their purification protocols, the selection of the ideal buffer for crystallization trials using the method of differential scanning fluorimetry (DSF) and at last the protein crystallization. Another part of the thesis is the measurement of the enzymatic activity of pNth1 WT in the presence of Bmh1 protein, verification of trehalose binding to the selected constructs of Nth1 using differential scanning fluorimetry (DSF), thermoforesis (MST) and further crystallization with trehalose. Neutral trehalase is highly conserved trehalase that has been found in a wide variety of organisms. These enzymes belong to the class of hydrolases, subgroup of glycosidases and hydrolytically cleave trehalose into two glucose molecules. Trehalose is a naturally occurring non-reducing disaccharide serving in yeast cells a source of carbon and energy as well as protection against stress conditions such as a thermal shock. Trehalose hydrolysis is essential for flying insects, because it is present as the main sugar component of insect haemolymph, therefore trehalase inhibitors...
Klíčová slova: DSF; MST; neutrální trehalasa; proteinová krystalografie; DSF; MST; neutral trehalase; protein crystallography

Instituce: Fakulty UK (VŠKP) (web)
Informace o dostupnosti dokumentu: Dostupné v digitálním repozitáři UK.
Původní záznam: http://hdl.handle.net/20.500.11956/82241

Trvalý odkaz NUŠL: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-342003


Záznam je zařazen do těchto sbírek:
Školství > Veřejné vysoké školy > Univerzita Karlova > Fakulty UK (VŠKP)
Vysokoškolské kvalifikační práce > Diplomové práce