Original title: Příprava DNA vazebné domény transkripčního faktoru FoxO4 pro tryptofanová fluorescenční měření
Translated title: Preparation of DNA binding domain of transcription factor Fox04 for tryptophan fluorescence measurements
Authors: Vácha, Petr
Document type: Rigorous theses
Year: 2010
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
Tato práce je součástí projektu, který se zabývá způsobem interakce 14-3-3 proteinů s forkhead transkripčním faktorem FoxO4. 14-3-3 proteiny jsou proteiny interagující s celou řadou buněčných proteinů. Touto interakcí ovlivňují aktivitu, či buněčnou lokalizaci svých vazebných partnerů. Transkripční faktor FoxO4 hraje významnou roli v regulaci buněčného cyklu, apoptózy, reakce na oxidativní stres a řady dalších buněčných procesů. Transkripční aktivita FoxO4 je řízena skrze fosforylaci protein kinasou B. Fosforylace způsobí inhibici vazby FoxO4 na DNA, navázání 14-3-3 proteinu na FoxO4 a transport vzniklého komplexu z jádra. Jedním z cílů projektu je objasnění molekulárního mechanismu těchto interakcí. Hlavním cílem této práce bylo vytvoření mutantní cDNA proteinu FoxO4 obsahujícího pouze dva tryptofanové zbytky pomocí cílené bodové metageneze, který poslouží jako modelový systém pro studium konformačních změn DNA vazebné domény FoxO4 při interakci se 14-3-3 proteinem. Po získání cílové mutantní cDNA tento protein exprimovat a purifikovat. Kromě toho byla součástí práce ještě exprese a purifikace proteinu 14-3-3, který je součástí modelového systému pro studium mechanismu interakce těchto dvou proteinů. This thesis was worked up as a part of a project that is concerned with the manner of interaction of 14-3-3 proteins with forkhead transcriptional faktor FoxO4. 14-3-3 proteins are proteins interacting with a considerable amount of cell proteins. They affect activity and cell localization through this interaction. Transcriptional factor FoxO4 plays significant role in regulation of a cell cycle, apoptosis, respond to oxidative stress and many other cell proceses. Transcriptional aktivity of FoxO4 is regulated through phophorylation by protein kinases B. This phosphorylation induce inhibition of FoxO4/DNA binding, induce FoxO4/14-3-3 binding and thus relocalization of this complex from a cell core to cytoplasma. One of main goals of this project is to explain molecular mechanisms of these interactions. Main goal of this thesis was to create cDNA of a mutational protein FoxO4 containing just two tryptophan residues by site directed mutagenesis and after gaining this cDNA to express and pyrity this mutational FoxO4. This mutational protein was going to be a part of a model system for conformational changes studies. Besides expression and purification of 14-3-3 protein that is also part of our model system was performed.

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/32919

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-297395


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Rigorous theses