Original title: Využití metody RNA interference pro cílenou inhibici exprese genů na úrovni mRNA
Translated title: Use of RNA Interference for Targeted Inhibition of Gene Expression on the mRNA Level
Authors: Radilová, Hana ; Kvasničková, Eva (advisor) ; Šmarda, Jan (referee) ; Flachs, Pavel (referee)
Document type: Doctoral theses
Year: 2009
Language: cze
Abstract: Cyklooxygenáza (COX) je klíčovým enzymem v metabolismu arachidonové kyseliny (AA). Přeměňuje AA na prostaglandin H2, který je dále metabolizován různými enzymy na biologicky aktivní prostanoidy. Tato práce byla zaměřena na studium vztahů mezi geny souvisejícími s metabolismem AA. Pomocí RNA interference byla specificky snižována exprese vždy jedné z izoforem COX v buněčné linii rakoviny děložního čípku (Hep2). Cyklooxygenáza 1 (COX-1) byla úspěšně inhibována jak pomocí siRNA ("small interfering RNA"), tak shRNA ("short hairpin RNA") sekvencí. Pro snížení exprese cyklooxygenázy 2 (COX-2) se nepodařilo získat výrazně účinnou sekvenci shRNA. Bylo připraveno několik klonů buněčné linie Hep2 se specificky a stabilně inhibovanou expresí COX-1 (Hep2_shRNA1), které byly využity pro další studie. Snížení COX-1 bylo potvrzeno na úrovni mRNA pomocí real-time PCR, na úrovni proteinů pomocí Westernu blotu a na funkční úrovni metodou ELISA. Specifická a stabilní inhibice exprese COX-1 způsobila výrazné snížení mikrozomální prostaglandin E syntázy 1 (mPGES-1). Dále bylo v linii Hep2_shRNA1 nalezeno významné zvýšení hladiny mRNA genu ABCC4 ("ATP-binding cassette, sub-family C, member 4"). Tento gen kóduje transportér MRP4 ("Multidrug resistance protein 4"), který je přenašečem některých cytostatik, antivirotik a...

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/23679

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-278455


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Doctoral theses