Original title: Použití rostlinných virů pro navození cílených epigenetických změn u Solanum tuberosum a Nicotiana benthamiana
Translated title: Introducing targeted epigenetic changes in Solanum tuberosum and Nicotiana benthamiana by plant viruses
Authors: Dušek, Jakub ; Ryšánek, Pavel (advisor) ; Barbora, Barbora (referee)
Document type: Master’s theses
Year: 2016
Language: cze
Publisher: Česká zemědělská univerzita v Praze
Abstract: [cze] [eng]
Předkládaná diplomová práce se zabývá navozením cílených epigenetických změn pomocí upraveného X viru bramboru (PVX, Potato virus X). Z rostlin Solanum tuberosum a Nicotiana benthamiana byl pomocí PCR a speciálně navržených primerů izolován gen nesoucí sekvenci PDS. Primery byly navrženy tak, aby byly univerzální pro obě rostliny a Tm teplota byla v rozmezí 5 °C. Na hraničních úsecích PCR produktů byla přidána restrikční místa (XhoI a ClaI) navržena tak, aby po vložení do PVX byla sekvence PDS v AS orientaci. Virový vektor pGR106 byl později vnesen do rostlin za pomoci Agrobacterium tumefaciens. Tím došlo k degradaci cílového transkriptu, vedoucího k umlčení (silence) genu. Jedná se tedy PTGS (posttranscriptional gene silencing). Fenotypovým projevem je částečné vyblednutí zeleného rostlinného pletiva. Část rostlin se inokulovala v podmínkách in vitro, a proto musela být vypracována nová metodika, umožňující účinnou inokulaci rostlin sterilním virovým inokulem. In this thesis we have focused on the induction of targeted epigenetic changes using modified Potato Virus X vector (PVX, Potato virus X). The gene coding sequence phytoene desaturase (PDS) was isloated from Solanum tuberosum and Nicotiana benthamiana plants using PCR. Primers were specifically designed as universal for both plant species and their Tm temperatures was in the range of 5 °C. The primers also added flanking restriction sites XhoI and ClaI to simplify cloning of PDS PCR products into full length PVX viral vector in AS orientation. The PVX viral vector pGR106 was later introduced into the plants using Agrobacterium tumefaciens. Infection led to the degradation of the target transcript and to efficient gene silencing (PTGS posttranscriptional gene silencing). The process has been manifested by complete or partial fading of a green plant tissue phenotype.. Some of the plants were aslso inoculated in in vitro conditions, for which a novel technique has been implemented.
Keywords: DNA; PDS; Posttranskripční genový silencing; PVX

Institution: Czech University of Life Sciences Prague (web)
Document availability information: Available in the CZU repository.
Original record: https://is.czu.cz/zp/index.pl?podrobnosti_zp=205780

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-258927


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Czech University of Life Sciences Prague
Academic theses (ETDs) > Master’s theses