Original title: Analýza metabolických efektů transkripčních faktorů chmelu (H. lupulus) u heterologního systému Petunia hybrida
Translated title: Analysis of metabolome effects of hop (H. lupulus) transcription factors in heterologous of Petunia hybrida
Authors: MORAVCOVÁ, Vendula
Document type: Bachelor's theses
Year: 2013
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
Transformace rostlin je dnes klíčovou metodou v oblasti biologie rostlin a rovněž se jedná o jedinečný praktický nástroj v zlepšování odrůd kulturních rostlin. Při této práci byla snaha získat transgenní rostliny Petunia x hybrida obsahující transgen nptII (gen pro kanamycinovou rezistenci) pomocí nepřímé transformace s využitím bakterií Agrobacterium tumefaciens. V podmínkách in vivo byl ze semen vypěstován pokusný materiál v podobě rostlin Petunia x hybrida cv. Andrea. Pro pokusy byly použity tři různé konstrukty, a to HLWD40 3278-80 a HLbHLH 3577 a HLbHLH 3677 GFP. Z listů petúnií byly připraveny listové disky a byla provedena kokultivace na 1/2MS s bakteriemi nesoucími příslušné konstrukty. Kokultivace probíhala přes noc a následně byly přepasážovány na pevné regenerační medium. Z listových disků postupně vznikly kalusy (shluky buněk), na kterých regenerovaly nové rostliny. Na explantátech začaly během prvních 2-4 týdnů po transfromaci vznikat kalusy a během dalšího týdne bylo možné odebrat první regeneranty. Na jeden explantát připadlo průměrně okolo 7 regenerantů, přičemž explantáty regenerované konstruktem HLbHLH 3577 regenerovaly lépe než regeneranty transformované konstruktem HLWD 40 3278-80. Během transformace byly získány regeneranty. Pomocí ?tissue? PCR bylo zjištěno, že 15 rostlin nese gen pro kanamycinovou rezistenci. Účinnost transformace byla 3,75%. Úspěšná transformace by měla splňovat i podmínku, že transformované rostliny budou fertilní. Z tohoto důvodu byl udělán pokus křížení, kdy byly kříženy rostliny transformované Pap1 1527/2 a Pap1 1572/4 s rostlinami kříženými HLWD 40 3278-80. Na vyrostlých rostlinách byla provedena reakce PCR. Plant transformation is now a key research in plant biology, and also is a unique practical tool in the improvement of varieties of cultivated plants. The aim of this work was to obtain transgenic plants Petunia x hybrida containing transgene nptII (kanamycin resistance gene) using the indirect transformation by Agrobacterium tumefaciens. In terms of in-vivo was grown from seeds experimental material in the form of plant Petunia x hybrida cv. Andrea. For the experiments three different constructs HLWD40 3278-80 and HLbHLH 3577 and HLbHLH 3677 GFP were used. The leaf explants from Petunia plants were prepared. Explants were transferred using tweezers into the crucible containing liquid ? MS and prepared bacteria were added. Thus prepared explants remained in bacteria the next day, when they were transferred to the regenerating solid ground. The explants formed callus gradually (clusters of cells) which regenerate a new plant. Transformation should satisfy the condition that the transformed plants should be fertile. For this reason, an attempt was made crossing the transformed plants were crossed Pap1 1527/2 and Pap1 1572/4 with plants crossed HLWD 40 3278-80. The grown plants were analysed by a PCR reaction. The explants began during the first 2-4 weeks after transfromation to form callus and during the next week to remove the first regenerants. At one exulant fell averaged around 7 regenerants and the explants regenerated by construct HLbHLH 3577 regenerate better than regenerants transformed with construct HLWD 40 3278-80. During the transformation we obtained regenerants. With "tissue" PCR, it was found that 15 plants carried the gene for kanamycin resistance. Transformation efficiency was 3.75%.
Keywords: Agrobacterium tumefaciens; PCR; Petunia x hybrida; Transformation; Agrobacterium tumefaciens; PCR; Petunia x hybrida; Transformace
Citation: MORAVCOVÁ, Vendula. Analýza metabolických efektů transkripčních faktorů chmelu (H. lupulus) u heterologního systému Petunia hybrida. České Budějovice, 2013. bakalářská práce (Bc.). JIHOČESKÁ UNIVERZITA V ČESKÝCH BUDĚJOVICÍCH. Fakulta zemědělská a technologická

Institution: University of South Bohemia in České Budějovice (web)
Document availability information: Fulltext is available in the Digital Repository of University of South Bohemia.
Original record: http://www.jcu.cz/vskp/25351

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-154220


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > University of South Bohemia in České Budějovice
Academic theses (ETDs) > Bachelor's theses